家蚕贮存蛋白基因Bm30K-19G1和BmSP1在抵御球孢白僵菌感染过程中的作用
发布时间：2024-05-08 21:23
家蚕(Bombyx mori)不仅是一种重要的经济昆虫,也是一种重要的模式昆虫,在昆虫的生理、发育、遗传和免疫调控等科学研究领域发挥着重要作用。在蚕业生产中,病原微生物的入侵常常给养蚕业带来极大的损失;其中,球孢白僵菌(Beauveria bassiana)因其致病力强、易传染、宿主范围广等特点成为对蚕业生产危害最严重的一种病原真菌。本研究小组前期通过数字基因表达谱技术筛选了家蚕在感染球孢白僵菌后的差异表达基因,发现家蚕感染球孢白僵菌后家蚕贮存蛋白(storage protein,SP)基因的表达水平显著上调。因此推断贮存蛋白在家蚕应对球孢白僵菌侵染的过程中发挥着重要的生理生化作用及一定的抗真菌作用。本研究成功表达了家蚕贮存蛋白Bm30K-19G1,分别研究贮存蛋白在家蚕体内体外对球孢白僵菌孢子以及菌丝的抑制作用;并且通过杆状病毒表达系统表达了家蚕贮存蛋白BmSP1,研究其对球孢白僵菌的抑菌作用和在家蚕血淋巴中的抗黑化反应,并且进一步筛选获得了BmSP1的互作蛋白。得到的主要结果如下:1.家蚕贮存蛋白Bm30K-19G1对球孢白僵菌具有一定的抗真菌作用家蚕贮存蛋白Bm30K-19G1是...
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
英文缩写说明
摘要
Abstract
第1章 绪论
1.1 家蚕及球孢白僵菌的研究
1.2 昆虫贮存蛋白的研究
1.3 本课题研究目的及意义
1.4 本课题主要研究内容与研究方法
1.4.1 主要研究内容
1.4.2 实验技术路线
第2章 家蚕贮存蛋白Bm30K-19G1 的表达及纯化
2.1 引言
2.2 实验材料与试剂
2.2.1 主要实验材料
2.2.2 主要仪器与设备
2.2.3 主要试剂
2.2.4 主要试剂的配制
2.2.5 常用生物信息学软件及网址
2.3 实验材料与方法
2.3.1 供试家蚕
2.3.2 家蚕组织的收集
2.3.3 家蚕贮存蛋白Bm30K-19G1 基因的克隆
2.3.4 Bm30K-19G1 的组织特异表达谱
2.3.5 重组蛋白Bm30K-19G1 的表达与纯化
2.4 结果与分析
2.4.1 Bm30K-19G1 基因的克隆以及表达载体的构建
2.4.2 Bm30K-19G1 的组织特异表达谱
2.4.3 Bm30K-19G1 重组蛋白的表达与鉴定
2.5 本章讨论
第3章 家蚕贮存蛋白Bm30K-19G1 对球孢白僵菌的抑制作用
3.1 引言
3.2 实验材料与试剂
3.2.1 主要实验材料
3.2.2 主要仪器与设备
3.2.3 主要试剂与配制
3.3 实验方法
3.3.1 Bm30K-19G1 对球孢白僵菌孢子以及菌丝的抑制作用
3.3.2 抑菌圈试验
3.3.3 家蚕体内抑菌试验
3.4 结果与分析
3.4.1 重组蛋白Bm30K-19G1 对液体培养球孢白僵菌的抑制作用
3.4.2 Bm30K-19G1 对球孢白僵菌的抑菌圈试验
3.4.3 Bm30K-19G1 对家蚕体内球孢白僵菌的抑菌作用
3.5 本章讨论
第4章 家蚕贮存蛋白BmSP1 的表达分析
4.1 引言
4.2 实验材料与试剂
4.2.1 主要实验材料
4.2.2 主要仪器与设备
4.2.3 主要试剂与配制
4.3 实验方法
4.3.1 家蚕组织的收集
4.3.2 BmSP1 基因的克隆与生物信息学分析
4.3.3 BmSP1 的表达谱
4.3.4 重组表达载体p Fast Bac1-EGFP-SP1 的构建
4.3.5 BmSP1 重组蛋白的验证
4.4 结果与分析
4.4.1 BmSP1 基因的克隆与生物信息学分析
4.4.2 BmSP1 的表达谱
4.4.3 BmSP1 重组表达载体的构建
4.4.4 重组蛋白的验证
4.5 本章讨论
第5章 家蚕贮存蛋白BmSP1 互作蛋白的筛选与鉴定
5.1 引言
5.2 实验材料与试剂
5.2.1 主要实验材料
5.2.2 主要仪器与设备
5.2.3 主要试剂与配制
5.3 试验方法
5.3.1 重组蛋白BmSP1 对白僵菌的抑菌作用
5.3.2 BmSP1 在家蚕体内的过表达及其抗黑化反应
5.3.3 BmSP1 互作蛋白的筛选
5.3.4 BmSP1与BmLP6 的相互作用验证
5.4 结果与讨论
5.4.1 BmSP1 在家蚕体内的过表达
5.4.2 重组蛋白BmSP1 对白僵菌的抑菌作用
5.4.3 BmSP1 的抗黑化反应
5.4.4 BmSP1 互作蛋白的筛选
5.4.5 BmSP1与BmLP6 的相互作用验证
5.5 本章讨论
第六章 全文结论与展望
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的论文
致谢
资助项目
本文编号：3967846
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
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摘要
Abstract
第1章 绪论
1.1 家蚕及球孢白僵菌的研究
1.2 昆虫贮存蛋白的研究
1.3 本课题研究目的及意义
1.4 本课题主要研究内容与研究方法
1.4.1 主要研究内容
1.4.2 实验技术路线
第2章 家蚕贮存蛋白Bm30K-19G1 的表达及纯化
2.1 引言
2.2 实验材料与试剂
2.2.1 主要实验材料
2.2.2 主要仪器与设备
2.2.3 主要试剂
2.2.4 主要试剂的配制
2.2.5 常用生物信息学软件及网址
2.3 实验材料与方法
2.3.1 供试家蚕
2.3.2 家蚕组织的收集
2.3.3 家蚕贮存蛋白Bm30K-19G1 基因的克隆
2.3.4 Bm30K-19G1 的组织特异表达谱
2.3.5 重组蛋白Bm30K-19G1 的表达与纯化
2.4 结果与分析
2.4.1 Bm30K-19G1 基因的克隆以及表达载体的构建
2.4.2 Bm30K-19G1 的组织特异表达谱
2.4.3 Bm30K-19G1 重组蛋白的表达与鉴定
2.5 本章讨论
第3章 家蚕贮存蛋白Bm30K-19G1 对球孢白僵菌的抑制作用
3.1 引言
3.2 实验材料与试剂
3.2.1 主要实验材料
3.2.2 主要仪器与设备
3.2.3 主要试剂与配制
3.3 实验方法
3.3.1 Bm30K-19G1 对球孢白僵菌孢子以及菌丝的抑制作用
3.3.2 抑菌圈试验
3.3.3 家蚕体内抑菌试验
3.4 结果与分析
3.4.1 重组蛋白Bm30K-19G1 对液体培养球孢白僵菌的抑制作用
3.4.2 Bm30K-19G1 对球孢白僵菌的抑菌圈试验
3.4.3 Bm30K-19G1 对家蚕体内球孢白僵菌的抑菌作用
3.5 本章讨论
第4章 家蚕贮存蛋白BmSP1 的表达分析
4.1 引言
4.2 实验材料与试剂
4.2.1 主要实验材料
4.2.2 主要仪器与设备
4.2.3 主要试剂与配制
4.3 实验方法
4.3.1 家蚕组织的收集
4.3.2 BmSP1 基因的克隆与生物信息学分析
4.3.3 BmSP1 的表达谱
4.3.4 重组表达载体p Fast Bac1-EGFP-SP1 的构建
4.3.5 BmSP1 重组蛋白的验证
4.4 结果与分析
4.4.1 BmSP1 基因的克隆与生物信息学分析
4.4.2 BmSP1 的表达谱
4.4.3 BmSP1 重组表达载体的构建
4.4.4 重组蛋白的验证
4.5 本章讨论
第5章 家蚕贮存蛋白BmSP1 互作蛋白的筛选与鉴定
5.1 引言
5.2 实验材料与试剂
5.2.1 主要实验材料
5.2.2 主要仪器与设备
5.2.3 主要试剂与配制
5.3 试验方法
5.3.1 重组蛋白BmSP1 对白僵菌的抑菌作用
5.3.2 BmSP1 在家蚕体内的过表达及其抗黑化反应
5.3.3 BmSP1 互作蛋白的筛选
5.3.4 BmSP1与BmLP6 的相互作用验证
5.4 结果与讨论
5.4.1 BmSP1 在家蚕体内的过表达
5.4.2 重组蛋白BmSP1 对白僵菌的抑菌作用
5.4.3 BmSP1 的抗黑化反应
5.4.4 BmSP1 互作蛋白的筛选
5.4.5 BmSP1与BmLP6 的相互作用验证
5.5 本章讨论
第六章 全文结论与展望
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的论文
致谢
资助项目
本文编号：3967846
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