集胞藻酰基载体蛋白基因过量表达对脂肪酸合成的影响

发布时间：2024-05-09 00:10

　　酰基载体蛋白(ACP)是微生物脂肪酸生物合成途径中的一个关键蛋白。为了促进集胞藻脂肪酸的积累,以集胞藻PCC6803为研究对象,成功构建了用于过量表达ACP(ssl2084)基因的同源重组质粒ssl2084~((+))并在集胞藻PCC6803中进行转化。将ssl2084~((+))突变株进行DNA水平和蛋白质水平鉴定,结果表明,ssl2084基因已经得到过量表达。利用气相色谱—质谱联用技术(GC-MS)对突变藻株在不同温度下脂肪酸的含量及组分进行检测,发现在30℃培养条件下ssl2084~((+))突变株中C12:0、C16:0和C18:0的含量显著增加,分别为1.50、8.74和0.60 mg·g^-1,与野生型相比分别增加了54.71%、50.82%和155.86%;在20℃低温胁迫培养条件下,C12:0、C16:0和C18:0的含量分别达到1.70、11.85和2.31 mg·g^-1,与野生型相比分别增加了31.94%、47.35%和39.90%。以上结果表明,在集胞藻PCC6803中过表达ssl2084基因能提高集胞藻中的中长链脂肪酸的...

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【部分图文】：

图1集胞藻PCC6803脂肪酸的合成途径

酰基载体蛋白是一类具有保守丝氨酸残基的小分子质量(9ku)酸性蛋白,在脂肪酸合成过程中,ACP携带酰基链完成缩合、还原和脱氢等酶促反应。它是不同酰基链长度脂肪酸的acyl-ACP去饱和反应和质体类酰基转移酶作用的辅助因子[14]。目前在集胞藻PCC6803中ACP和脂肪酸合成之....

图3同源重组平台p5S1285UD的构建

Pcpc560基因的大小为560bp,ssl2084基因的大小为260bp。Pcpc560和ssl2084基因片段进行融合后的片段Pssl2084大小约为820bp。用SalⅠ、EcoRⅠ对Pssl2084片段与p5S1285UD质粒双酶切、以SmaⅠ对p5S1285UD+....

图2同源重组平台p5S1285UD和同源重组质粒ssl2084(+)的构建图谱

表1引物列表Table1Primersusedinthisstudy引物Primer序列Sequence(5′-3′)Pcpc560-SalI-FAATGTCGACACCTGTAGAGAAGAGTCCCTPcpc560-RTGAATTAATCTCCT....

图4同源重组质粒ssl2084(+)的构建

分别以野生型集胞藻PCC6803和ssl2084(+)突变株的基因组DNA为模板,用以下引物对扩增:Pcpc560-SalⅠ-F和ssl2084-EcoRⅠ-His-R、Pcpc560-SalⅠ-F和T1T2-R、slr1285U-KpnⅠ-F和ssl2084-EcoRⅠ-His....

本文编号：3968026