燕麦乙酰辅酶A羧化酶基因CT区的克隆及CRISPR/Cas9技术体系建立

发布时间：2024-05-12 13:10

　　燕麦属于禾本科燕麦属(Avena L.),一年生草本植物,是重要的粮食及饲草、饲料作物。化学除草剂的出现及广泛使用为田间除草带来了有效且省工的办法。“拿捕净”又名稀禾啶,是一种选择性除草剂,使用“拿捕净”清除燕麦田间的禾本科杂草时会对燕麦造成伤害,限制了除草剂对燕麦田间禾本科杂草的清除。乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)是植物代谢过程中催化植物脂肪酸合成的关键酶、限速酶,是“拿捕净”除草剂作用的靶蛋白,“拿捕净”识别ACCase的蛋白结构并与之相结合,从而达到抑制ACCase活性的目的,使脂类代谢受阻,进而杀死禾本科杂草。本研究克隆甜燕1号(sweety 1)的ACCase的CT区序列,进行生物信息学分析;构建CRISPR/Cas9基因编辑载体,通过基因枪转化法将载体导入甜燕1号(sweety 1)成熟胚中,以期获得抗“拿捕净”燕麦新种质。研究得到以下结果:1.利用同源序列克隆的方法,得到燕麦ACCase基因的CT区序列的2188bp,与已经报道的小麦(Triticum aestivum)、日本看麦娘(Alopecurus japonicus)、大穗看麦娘(Alopecurus myos...

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1技术路线图

赋予该品种抗“拿捕净”除草剂特性,得到抗“拿捕净”的新品种。1.7试验技术路线图图1技术路线图Fig.1Technologyroadmap19

图2甜燕1号的籽粒形态与脱皮后的形态

试验所用材料均种植于实验室花盆中。如图2。甜燕1号籽粒的形态以及脱皮后的形态。图2甜燕1号的籽粒形态与脱皮后的形态Fig.2ThestateofskinandpeelingofSweety1将燕麦幼苗用无菌无酶剪刀剪下，DEPC水处理约3-4次，无....

图3转基因燕麦的生长周期状态Fig.3Thegrowthstateofgeneticallymodifiedoats

6%的次氯酸钠将所得到的燕麦成熟胚浸泡10分钟，无菌水冲洗6-7次。然后将胚置于MS培养基（pH=5.8）上，每个培养皿上放置约20-30个胚，将其放置为一个圆圈（以便后期的基因枪轰击），见图3，随后将其置于22摄氏度的温室里过夜培养。3.3.3轰击前后外植体的处理将完整的燕麦....

图4燕麦组织总RNA提取Fig.4TotalRNAagarosegelelectrophoresisinA.sativa

4结果与分析4.1燕麦总RNA检测利用Trizol法提取燕麦总RNA，经1%琼脂糖凝胶电泳检测，结果见图4，图中的28S、18S与5SRNA三条条带清晰，燕麦总RNA没有发生降解，可用于反转录及后续实验进行。图4燕麦组织总RNA提取Fig.4TotalRNAaga....

本文编号：3971370