TFEB调控胃癌细胞的PRL-3基因启动子活性的研究

发布时间：2024-05-24 21:14

　　目的:探讨在胃癌腹膜侵袭转移中,与PRL-3启动子结合的转录因子TFEB对PRL-3的调控作用,从而在基因的转录层面,明确PRL-3在胃癌中高表达的分子机制。方法:首先,通过生物信息学等方法,分析了PRL-3的转录本及启动子情况,再通过预测PRL-3启动子区的转录因子结合位点,获得目标转录因子TFEB。进而构建了转录因子TFEB的pcDNA3.1的表达重组体。其次,利用单荧光素酶报告技术、双荧光素酶报告技术、过表达以及siRNA干扰技术,来研究转录因子TFEB对PRL-3启动子的调控作用。再利用染色质免疫共沉淀(ChIP)方法研究转录因子TFEB与PRL-3启动子区域的结合情况,以证实转录因子TFEB对PRL-3启动子具有调控作用。结果:PRL-3具有多个转录本,启动子区主要在2个区域,第一外显子上游启动子区和第一内含子内启动子区。第一外显子上游启动子比第一内含子内启动子活性高很多,第一外显子上游启动子的核心区域为-1bp^-445 bp。转录因子TFEB对PRL-3第一外显子上游启动子有正向调控作用,且与PRL-3第一外显子上游启动子的核心区域有直接结合,结合位点...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2-3pcDNA3.1（+）Vector(2)pcDNA3.1（+）-TFEB重组质粒,由上海吉凯生物技术有限公司构建完成

4图2-3pcDNA3.1（+）Vector(2)pcDNA3.1（+）-TFEB重组质粒,由上海吉凯生物技术有限公司构建3）pGL3-PRL-3-promoter,pGL34.10-PRL-3-promoter重组体由上海有限公司构建及保存。4）宿主菌E.col....

图3-1PRL-3转录本情况

第3章结果第3章结果3.1PRL-3转录本及启动子情况分析通过Ensemblgenomebrowser95（http://www.ensembl.org/index.html）发现PRL-3（PTP4A3）存在4个蛋白质亚型（173aa，148aa，87aa....

图3-2PRL-3启动子情况

第3章结果3.1PRL-3转录本及启动子情况分析通过Ensemblgenomebrowser95（http://www.ensembl.org/index.html）发现PRL-3（PTP4A3）存在4个蛋白质亚型（173aa，148aa，87aa，70aa），具....

图3-3胃癌SGC-7901细胞中PRL-3启动子活性分析

以海肾荧光素酶作为转染效率控制的内对照，再分别测定双荧光素酶活性，结果如图3-3。研究发现，第一外显子上游启动子活性比第一内含子内启动子活性要高的多。第一外显子上游启动子不同截短体的活性分析如图3-4，发现-1bp~-445bp截短体的启动子活性明显增强，所以研究确定了第....

本文编号：3981242