慢病毒介导小鼠K26/KAP26.1基因过表达对相关基因的调控作用

发布时间：2024-05-25 00:34

　　【目的】利用慢病毒介导过表达技术,明确小鼠K26和KAP26.1基因过表达后对角蛋白关联蛋白基因KAP6.2、KAP7.1、KAP8.2、KAP11.1和对骨形态发生蛋白基因BMP-4、BMPR-IB的影响,探究小鼠绒毛细度变化的影响机制,达到人为调控(如慢病毒载体技术)使相关基因过表达,改善动物绒毛品质的目的,为哺乳动物绒毛细度调控的研究奠定理论基础,【方法】试验在辽宁省生物技术与分子药物研发重点实验室完成,小白鼠采自大连医科大学实验动物中心,选取出生后5周龄昆明种雄鼠。在Genebank查找到小鼠基因K26(Gene ID:NM₀01033397)及KAP26.1(Gene ID:NM₀27105.2)序列,根据目的基因序列设计引物,将质粒转入生长状态良好的293T细胞,构建小鼠K26和KAP26.1基因慢病毒过表达载体,将含有目的基因K26及KAP26.1的慢病毒表达载体分别转染小鼠皮肤成纤维细胞,用荧光显微镜观察其转染情况,确定慢病毒表达载体转染成功后,从病毒感染后的细胞中抽提总RNA,将RNA反转录成c DNA后放入Eppendor...

【文章页数】：11 页

【文章目录】：
0 引言
1 材料与方法
    1.1 主要材料与试剂
    1.2 皮肤样品采集及细胞培养
    1.3 小鼠目的基因的过表达慢病毒包装及测定
        1.3.1 质粒准备
        1.3.2 细胞准备
        1.3.3 慢病毒包装
        1.3.4 病毒收获与浓缩
        1.3.5 慢病毒滴度测定(q PCR法)
    1.4 目的病毒及阴性对照慢病毒感染目的细胞
    1.5 从病毒感染后的细胞中抽提总RNA
    1.6 RNA反转录成c DNA
    1.7 Real-time PCR检测目的基因
2 结果
    2.1 小鼠目的基因载体构建
    2.2 小鼠目的基因的过表达慢病毒包装
    2.3 小鼠目的基因过表达后对其他相关基因的影响
3 讨论
    3.1 K26和KAP26.1基因过表达
    3.2 K26和KAP26.1基因过表达对其它角蛋白关联蛋白的影响
    3.3 K26和KAP26.1基因过表达对BMP信号通路的影响
4 结论



本文编号：3981444