橘小实蝇CRISPR/Cas9技术及其在doublesex基因功能研究中的应用

发布时间：2024-06-01 11:04

　　橘小实蝇是一种危害严重的实蝇类害虫,CRISPR/Cas9技术作为近年来发展迅速的遗传改造新技术,在实蝇类害虫的防治中具有很大的应用前景。CRISPR/Cas9技术在果蝇、家蚕以及蚊类等昆虫中研究应用比较广泛,包括该技术的建立与优化、功能基因的探索、转基因品系的研究等;而在实蝇类昆虫中的研究则仅限于技术体系的建立,其相关应用鲜有报道。Doublesex(dsx)基因作为昆虫性别决定关键基因,在昆虫性别分化以及生殖中具有重要作用。本研究通过对CRISPR/Cas9系统靶标位点的筛选、比较分析Cas9 mRNA/sgRNA和Cas9蛋白/sgRNA RNP复合体两种方法的敲除效率,我们建立了橘小实蝇CRISPR/Cas9技术体系,并以此为基础敲除橘小实蝇dsx基因,明确了dsx基因在橘小实蝇生殖发育中的作用。本研究有利于建立橘小实蝇在内的实蝇类害虫的CRISPR/Cas9技术与平台,并证明了dsx基因作为遗传改造的靶标基因在生物防治应用中的潜力,为橘小实蝇的遗传改造及绿色防控提供了理论和技术基础。1.Bddsx基因克隆与分析我们通过对Bddsx基因的克隆,补充了Bddsx基因组序列,增补的...

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1Doublesex基因在性别决定中的地位Fig.1-1Theroleofthedoublesexgeneinsexdetermination(Verhulstetal2010).

图1-1Doublesex基因在性别决定中的地位Fig.1-1Theroleofthedoublesexgeneinsexdetermination(Verhulstetal2010).1.1.3Doublesex基因功能及其研究现状已有的报....

图1-2CRISPR/Cas9技术基因编辑原理

CRISPR基因座中(Westraetal2012)。当噬菌体再次侵入时，tracrRNA、crRNA和Cas9形成的核糖核蛋白复合物(Ribonucleoproteincomplex,RNP)介导降解外源侵入DNA，从而抵御外源入侵。基于CRISPR/Cas9....

图2-1橘小实蝇交配示意图

（4）随后覆盖上卤烃油（Halocarbonoil）保湿；（5）利用Trans2K显微注射系统显微注射系统（Eppendorf）将提前配制好的Cas9mRNA/sgRNA和Cas9蛋白/sgRNARNP复合体分别注射入橘小实蝇胚胎中；（6）注射完成后，将胚胎置入....

图3-3Bddsx基因克隆Fig.3-3ThecloningofB.dorsalisdoublesexgene.A，PCR引物在Bddsx基因中的位置

30图3-3Bddsx基因克隆Fig.3-3ThecloningofB.dorsalisdoublesexgene.，PCR引物在Bddsx基因中的位置。矩形框为基因外显子，直线为内含子部分，灰色矩形框为基因序列域；黑色箭头为所用引物，F和R前相....

本文编号：3985795