小麦赤霉菌FGSG 0 7235基因的敲除及功能研究

发布时间：2024-06-04 04:03

　　小麦是世界三大粮食作物之一,小麦赤霉病(Fusarium head blight)是影响小麦产量和质量的重要病害。小麦赤霉菌(Fusarium graminearum)是引起小麦赤霉病的主要病原菌,小麦赤霉菌产生的真菌毒素对农作物和人畜均有严重危害。目前小麦赤霉菌的基因组测序已完成,这对于研究小麦赤霉病相关基因的致病机理至关重要。将小麦赤霉菌MGV1基因敲除后,对其敲除突变体做了转录组测序,与野生型小麦赤霉菌菌株PH-1对比后发现有差异基因的表达,共有2062个下调基因,1729个上调基因。通过基因差异表达结果分析,FGSG₀7235基因在MGV1基因缺失后表达量显著上调。GO注释预测该基因是异三聚体G蛋白复合物,具有水解酶活性,可在细胞内进行蛋白转运。因此,推测FGSG₀7235基因是受MGV1基因调控的上游基因,在MGV1通路中发挥作用。本实验选择FGSG₀7235基因作为研究对象,应用基因取代技术对其表型和功能进行初步研究。本实验使用Split-Marker基因敲除技术,成功构建含有潮霉素抗性基因hph的基因敲除盒...

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
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1 绪论
    1.1 前言
    1.2 小麦赤霉菌的生物学特征
    1.3 小麦赤霉病病害及防治方法
    1.4 小麦赤霉菌毒素
    1.5 小麦赤霉菌功能基因组学的研究
    1.6 FGSG₀7235基因研究背景
    1.7 本研究的目的和意义
2 小麦赤霉菌FGSG₀7235基因缺失盒的构建
    2.1 实验材料、试剂及仪器
        2.1.1 材料
        2.1.2 试剂
        2.1.3 仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 野生型菌株PH-1基因组DNA的提取
        2.2.2 质粒pCB1003DNA的提取
        2.2.3 FGSG₀7235基因敲除盒的构建
    2.3 结果与分析
        2.3.1 野生型菌株PH-1基因组DNA的提取
        2.3.2 pCB1003质粒DNA的提取
        2.3.3 PCR扩增FGSG₀7235基因上下游序列
        2.3.4 PCR扩增hph基因上下游序列
        2.3.5 PCR扩增Splitmarker重叠序列
    2.4 讨论
3 FGSG₀7235基因的敲除及转化子的筛选鉴定
    3.1 实验材料、试剂及仪器
        3.1.1 材料
        3.1.2 试剂
        3.1.3 仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 原生质体的制备与转化
        3.2.2 转化子的筛选和鉴定
    3.3 结果与分析
        3.3.1 转化子DNA的提取
        3.3.2 转化子的PCR正负筛选
    3.4 讨论
4 FGSG₀7235基因缺失突变体的表型观察及致病力检测
    4.1 实验材料、试剂和仪器
        4.1.1 材料
        4.1.2 试剂
        4.1.3 仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 菌落形态的观察
        4.2.2 菌落生长速度的测定
        4.2.3 有性杂交实验
        4.2.4 不同菌株培养液颜色的比较
        4.2.5 菌株对温度敏感性测定
        4.2.6 分生孢子形态观察
        4.2.7 产孢量的测定
        4.2.8 侵染番茄实验
    4.3 结果与分析
        4.3.1 菌落形态的观察
        4.3.2 菌落生长速度的测定
        4.3.3 有性杂交实验
        4.3.4 不同菌株培养液颜色的比较
        4.3.5 菌株对温度敏感性测定
        4.3.6 分生孢子形态观察
        4.3.7 产孢量的测定
        4.3.8 侵染番茄实验
    4.4 讨论
5 全文结论
参考文献
附录1
附录2
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文



本文编号：3988837