籼稻明恢86多基因遗传转化及再生体系的优化

发布时间：2024-06-06 01:01

　　水稻是我国重要的粮食作物之一,其稳定确保国家粮食的安全生产。但是土壤的干旱、水稻病虫害、除草剂等因素都会严重制约水稻的产量,同时也不同程度的影响着水稻的品质。为此,构建出一个多基因植物表达载体,通过多基因载体的遗传转化,获得包含高产、抗逆、抗虫、抗病等特性的水稻新材料是确保国家粮食安全生产的一种有效途径。本研究以实验室已有的遗传转化体系为基础,进一步通过改善和优化培养条件,期望获得一种更为快速且高效的多基因遗传转化体系。研究以籼稻明恢86为受体材料,将事先构建好的含作物高产基因RRM2,耐旱基因HS1,抗除草剂基因EPSPS,抗虫基因BT,凋亡抑制基因IAP和P35等基因的多基因载体(载体分别命名为P5和P8),进行遗传转化。本研究主要结果如下:1、在相同的诱导培养条件下,通过对明恢86的幼胚和成熟胚进行诱导,结果表明:明恢86幼胚中诱导出的愈伤组织结构好,愈伤组织亮黄、硕大,生长旺盛,出愈率高。明恢86成熟胚中诱导出的愈伤组织质地、结构较小,愈伤组织生长较为缓慢,出愈率比较低。2、通过筛选剂草甘膦和筛选剂G418对愈伤组织进行不同的筛选浓度的梯度筛选,结果表明:明恢86愈伤组织在筛选...

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同外植体在相同培养条件下，愈伤组织的生长状态、出愈率有较大的差异。??实验采用明恢８６的成熟胚和幼胚来诱导愈伤组织，将明恢８６的幼胚和成熟胚每??次诱导１００个，做３次重复实验。幼胚（图３－１?ａ）在培养基上诱导２－３天左右，??就能长出愈伤组织，可以看到愈伤组织颜色淡黄，质地....

培养和２８°Ｃ黑暗培养，培养时间同样是１４天。培养过程中每次接５７个筛选愈??伤，每个培养条件做３次重复实验。结果表明，２８°Ｃ光照培养条件下的愈伤组织??出现褐化的现象少（图３－２?ａ），愈伤组织的生长旺盛，颗粒硕大，颜色亮黄，??在光照筛选条件下长出的新愈伤组织较多抗性愈伤率....

３．５多基因的遗传转化??将多基因载体（分别命名为Ｐ５、Ｐ８）通过农杆菌介导转化到籼稻明恢８６中。??本实验采用农杆菌介导的转化籼稻明恢８６愈伤组织的遗传转化方法（图３－５）。??通过胚性愈伤组织的诱导、继代、侵染、共培养、筛选、分化、生根、炼苗等阶??段，获得８３株抗性植株。?....

３．７抗性植株的获得及检测??将多基因遗传转化载体Ｐ５、Ｐ８转化籼稻明恢８６，已获得抗性植株８３株（图??３－６）。用ＧＵＳ引物进行ＰＣＲ检测（图３－７），结果显示有些抗性植株为阳性植??株。但是用ＥＰＳＰＳ引物（图３－８）、ＲＲＭ引物（图３－９）、ＨＳ引物（图３－１０）、??Ｉ....

本文编号：3990067