拟南芥水杨酸代谢突变体的筛选克隆和S5H同源基因的功能分析

发布时间：2024-06-12 00:39

　　在植物中,水杨酸(SA)作为一种重要的内源激素调控植物的抗病、抗逆、生长发育和衰老。其代谢机理是SA研究的重要内容之一。在拟南芥中,SA合成和分解代谢路径尚未被阐述清楚。为了深入揭示水杨酸代谢的分子机制及生理功能,本文利用EMS诱变因SA积累而变小的拟南芥双突变体s3h*s5h,筛选表型恢复变大的突变体,用正向遗传学方法克隆SA代谢相关基因。同时通过生物信息学、分子生物学、生物化学、遗传学等研究方法研究一个水杨酸羟基化代谢候选基因At4g10490(DLO2)的生理学功能。取得的具体研究结果如下:(1)本文利用一种依赖于水杨酸突变体表型筛选水杨酸相关突变体的方法,对EMS诱变的水杨酸积累的拟南芥双突变体Col-O s3*s5h进行筛选,筛选出表型恢复变大的突变体,建立表型恢复突变体库。对己筛选出的突变体进行表型、直径及水杨酸代谢水平进行统计。本文己筛选出20个与水杨酸代谢及叶片衰老相关的突变体,并根据其表型及水杨酸代谢水平分为四类,分别为:Ⅰ表型恢复变大且叶片晚衰,SA含量降低的突变体;Ⅱ表型恢复变大且叶片晚衰,SA含量与双突变体s3h*s5h相似的突变体;Ⅲ表型恢复变大且叶片早衰,S...

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．２?Ｍ２代突变体表型??Ｆｉｇ?２．２?ｔｈｅ?ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ?ｏｆ?Ｍ２?ｍｕｔａｎｔｓ??

位于ＳＡ诱导早衰的信号通路中，那么该基因突变会抑制早衰的表型。因此我们??采用甲基磺酸乙脂（ＥＭＳ）化学诱变方法，对叶片严重早衰的拟南芥Ｈ／？七５／；双突变体??进行诱变，观察Ｍ２代植株发育表型（如图２．２所示），其中叶片变大和（或）抑制早衰??的突变体即为ＳＡ相关突变体。根据此....

图２．４叶片变大、晚衰且ＳＡ含量降低的突变体的表型分析??Ａ，２１天ＷＴ、与突变体的表型对比；Ｂ，?２１天ＷＴ、与突变体的直径对比

??图２．３．叶片变大和（或）抑制早衰的突变体表型??Ｆｉｇ?２．３?Ｔｈｅ?ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ?ｏｆ?ｌｅａｆ?ｍｏｒｐｈｉｎｇ?ａｎｄ／ｏｒ?ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇ?ｐｒｅｍａｔｕｒｅ?ａｇｉｎｇ?ｍｕｔａｎｔｓ??２．２．１叶片变大、晚衰且ＳＡ含量降低的突变体??在筛选得到....

图２．６叶片变大、早衰且ＳＡ含量未变的突变体的表型和代谢分析??Ａ，２１天与突变体的表型对比；Ｂ，?２１天ＷＴ、ｄ／ｉｈ５Ａ与突变体的直径对比；Ｃ，??２１天ＷＴ、■ｄＰｄ／；与突变体的水杨酸代谢分析对比

＾?＾°°８＾§§§§§２§８§§２８??—ｘ〇Ｔ５—？－ｒ〇Ｃ？Ｋ５－＾．ａ）ｈ〇ＣＯ－Ｐ＾ＣＤ—??图２．５叶片变大、晚衰且ＳＡ含量降低的突变体的代谢分析??Ｆｉｇ?２．５?Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｍｕｔａｎｔｓ?ｗｉｔｈ?ｌａｒｇｅ?ｌｅａｆ，?ｌａｔｅ....

图２．９杂交ＦＩ代表型及代谢分析??Ａ，杂交后Ｆ］代表型分析：Ｂ，杂交Ｆ１代代谢分析

ＡｔＵ６－２６＿ｓｇＲＮＡ－ＳＫ基因片段进行连接、转化，然后按照Ｉ．５．１．２?（７）方法进行菌落??ＰＣＲ验证，并挑选阳性克隆摇菌提取质粒，按照１．５．１．２?（８）方法对所提质粒进行酶切验??证。如图２．１０Ａ所示，菌落ＰＣＲ产物电泳条带大小为４９９?ｂｐ，与预期大小一致。其....

本文编号：3992959