Ⅰ型干扰素受体1（IFNAR1）基因敲除猪肾上皮细胞系构建

发布时间：2024-12-19 04:38

　　Ⅰ型干扰素是天然免疫系统中发挥关键作用的细胞因子。Ⅰ型干扰素受体(Interferon-α/β receptor,IFNAR)结合配体Ⅰ型干扰素后激活下游JAK-STAT等信号转导途径,诱导干扰素诱导基因(Interferon stimulated gene,ISG)转录。低亲和力Ⅰ型干扰素受体 1(Type Ⅰ IFN receptor 1,IFNAR1)是保障完整IFNAR活化必不可少的组成部分。本试验以慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因组编辑技术构建IFNAR1基因稳定敲除猪肾上皮PK15细胞系。首先设计单链引导RNA(Single guide RNA,sgRNA)构建重组质粒plFNAR1-sgRNA;然后将重组质粒与pMD2.G和psPAX2慢病毒包装质粒共转到人胚胎肾细胞(Human embryonic kidney 293T/17,HEK293T/17)收取慢病毒液;用该慢病毒液感染PK15细胞并通过嘌呤霉素(Puromycin,Puro)筛选获得IFANR1基因敲除的多克降细胞系;最终通过有限稀释的方法获得PK15-IFNAR1-/-单克隆细胞系。酶标仪检测CCK-8...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

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本文编号：4017670