白桦BpJMJ18基因启动子克隆及表达分析

发布时间：2025-01-15 16:41

　　 为探究BpJMJ18基因在植物生长发育过程中的功能,本研究利用PCR技术克隆白桦(Betula platyphylla)BpJMJ18基因的启动子,通过生物信息学分析发现,该启动子序列中除了包含TATA-box和CAAT-box等基本顺式作用元件外,还具有光响应元件和多种激素应答相关的元件;进而构建植物表达载体pBI101-BpJMJ18pro::GUS,并用农杆菌介导的瞬时转化法侵染白桦,对转基因株系进行GUS染色分析,结果发现BpJMJ18基因启动子能够驱动GUS基因在白桦的主根、侧根、根尖、叶片的维管束和嫩茎中均检测到表达。上述结果说明白桦BpJMJ18启动子具有启动活性,可能影响植物的生长发育。

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【部分图文】：

图1 Bp JMJ18基因在白桦不同组织表达分析

为了研究白桦BpJMJ18基因在各个组织部位的表达情况，提取白桦顶芽、幼叶、成熟叶、初生茎、过渡茎、成熟茎及根的totalRNA，进行荧光定量PCR检测，结果如图1所示。表明BpJMJ18基因在各个组织部位中均有所表达，且BpJMJ18基因的表达模式在根和幼叶中的表达水平....

图2 白桦Bp JMJ18基因启动子的克隆及鉴定A.Bp JMJ18启动子的克隆(M.DNA marker DL5000;1.JMJ18启动子的PCR扩增产物);B.p EASY-Bp JMJ18pro载体在大肠杆菌菌液中的PCR检测(M.DNA marker DL5000;1～6.p EASY-Bp JMJ18pro转化子的菌液PCR检测;7．阴性对照)

将测序正确的pEASY-Blunt-BpJMJ18pro菌液提取质粒，利用限制性内切酶HindⅢ对pEASY-Blunt-BpJMJ18pro和pBI101-GUS进行单酶切(见图4A)，回收目的片段，利用TaKaRa公司的SolutionⅠ进行连接，转化大肠杆菌(....

图3 Bp JMJ18启动子作用元件示意图

图2白桦BpJMJ18基因启动子的克隆及鉴定A.BpJMJ18启动子的克隆(M.DNAmarkerDL5000;1.JMJ18启动子的PCR扩增产物);B.pEASY-BpJMJ18pro载体在大肠杆菌菌液中的PCR检测(M.DNAmarkerDL5000;1～....

图4 植物表达载体p BI101-Bp JMJ18pro::GUS的构建及验证A．限制性内切酶酶切产物的结果(M.DNA marker DL5000;1.p EASY-Blunt-Bp JMJ18pro单酶切条带;2．质粒p BI101-GUS的单酶切条带);B．植物表达载体p BI101-Bp JMJ18pro::GUS的菌液PCR检测(M.DNA marker DL5000;1～7.p BI101-Bp JMJ18pro::GUS菌液的PCR产物;8．阴性对照);C.GV3101-p BI101-Bp JMJ18pro::GUS的菌液PCR检测(M.DNA marker DL5000;1～9．农杆菌转化子的菌液PCR检测;10．阴性对照)

为了进一步验证BpJMJ18启动子在白桦中的表达活性，我们将用农杆菌介导的瞬时转化法侵染白桦组培苗，进行了3次重复试验并通过GUS染色观察其表达特征。结果如图5A所示，发现BpJMJ18启动子驱动的GUS基因在白桦的主根、侧根、根尖、叶片的维管束和嫩茎中均检测到表达，在老茎中....

本文编号：4027573