柑橘漆酶基因家族的鉴定及抗逆性研究

发布时间：2025-01-18 16:58

　　柑橘(Citrus)是我国种植面积第一、产量第二的果树,具有极高的经济价值。漆酶(Laccase)是一类含铜离子的糖蛋白氧化酶,在高等植物木质素合成和抗逆境胁迫等方面发挥着重要的作用,具有广阔的应用前景。目前,柑橘漆酶的功能研究甚少,基因表达与调控机制还不清楚。本论文首先介绍了对甜橙(Citrussinensis)的漆酶基因家族进行生物信息学分析的结果,并克隆了两个具有潜在抗逆功能基因的启动子;其次描述了基于启动子顺式调控元件分析的qRT-PCR检测结果,即该家族基因部分成员在不同组织和器官中的表达特性,以及不同逆境胁迫与激素处理下的表达特性;最后,分析了低温胁迫下柑橘漆酶活力、可溶性蛋白及相对电导率的变化情况。主要研究结果如下:1.生物信息学分析发现,在甜橙基因组中共有27个Laccase(CsLAC)基因家族成员,27个成员氨基酸序列相似性较低,且外显子与内含子间隔的结构差异大,该家族基因的内含子数目在2～5个之间,其基因结构与编码产物的理化性质存在明显差异;染色体定位表明它们在6号、7号及8号染色体上聚集,4号、5号及9号染色体上没有漆酶基因的分布。依据编码产物构建的系统发育树表明...

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１柑橘漆酶基因家族的染色体定位??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１．?Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ?ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｃｉｔｒｕｓ?ｓｉｎｅｎｓｉｓ?ｌａｃｃａｓｅ?ｇｅｎｅ?ｆａｍｉｌｙ??

图２－１柑橘漆酶基因家族的染色体定位??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１．?Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ?ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｃｉｔｒｕｓ?ｓｉｎｅｎｓｉｓ?ｌａｃｃａｓｅ?ｇｅｎｅ?ｆａｍｉｌｙ??橘漆酶蛋白序列和糖基化位点分析??ＡＣ蛋白家族的氨基酸序列差异较大，长度变化在１３３？....

图２－４柑橘和拟南芥漆酶蛋白的系统进化树??

?１３２．９７?４．７０Ｅ－３９??ＣｓＬＡＣ氨基酸序列比对显示出较低的序列相似性（附录１）。然而，在每个ＣｓＬＡＣ成??员中观察到不同的铜配体Ｌ１－Ｌ４特征序列（图２－３）。结合铜离子的保守氨基酸序列位于??Ｌ１－Ｌ４保守区（图２－３）。根据轴向配体类型的不同，ＣｓＬＡＣ可暂时....

图２－６?ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳检测??

２．２．９伏令夏橙漆酶基因启动子ＰＣＲ扩增??使用ＣｓＵＣ７，?ＣｓＺＸＣＪ启动子的引物进行ＰＣＲ扩增，将ＰＣＲ产物进行１％琼脂糖??凝胶电泳检测（图２－７），扩增结果接近１５００ｂｐ，与预期相符，可进行测序。??Ｍ?１－１?１－２?１－３?２－１?２－２?２－３??２０００ｂｐ....

图2-7CsLAC1,CsLAC3启动子PCR扩增凝胶电泳

－－－２〇＿ｐ—??图２－６?ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳检测??Ｍ：?ＤＬ２０００ｍａｋｅｒ；?１－１￣１－３：伏令夏橙叶片基因组ＤＮＡ??Ｆｉｇｕｒｅ?２－６?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｔｏ?ｄｅｔｅｃｔ?ＤＮＡ??Ｍ：?ＤＬ?２０００ｍａｋｅｒ；?１－....

本文编号：4028883