沙柳NACs基因克

发布时间：2025-02-08 18:16

　　沙柳是我国西北地区防风治沙的主要树种之一,对维持沙地生态系统的稳定起重要作用,是城市建设和环境绿化工程中的重要元素。促进沙柳的分子定向育种,研究基因调控机制对于开发沙柳潜在价值有重要意义。本研究利用同源克隆技术从沙柳中克隆获得SpsNAC005、SpsNAC034、SpsNAC041、SpsNAC042基因,对其进行生物信息学分析,组织特异性表达及构建目标基因的超量表达载体。研究结果如下:①SpsNAC005基因的CDS序列长度为927bp,编码309个氨基酸,SpsNAC034基因的CDS序列长度为1797bp,编码599个氨基酸,SpsNAC041基因的CDS序列长度为885bp,编码295个氨基酸,SpsNAC042基因的CDS序列长度为900bp,编码300个氨基酸。四个基因均有NAC基因家族的典型结构域NAM,属NAC基因家族。②RT-qPCR结果表明,SpsNAC042在成熟的叶中表达量最高,在花中几乎不表达。③本研究获得SpsNAC005超表达转基因84K杨株系7个,SpsNAC005超表达转基因河北杨株系5个,SpsNAC034超表达转基因河北杨株系5个,SpsNAC04...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 引言
    1.1 沙柳的生物学特性及相关研究
        1.1.1 沙柳的生物学特性
        1.1.2 沙柳的应用
        1.1.3 沙柳的基因组学的相关报道
    1.2 NAC基因家族及其相关研究
        1.2.1 NAC基因家族的结构
        1.2.2 NAC基因的功能
            1.2.2.1 干旱、盐胁迫及渗透胁迫
            1.2.2.2 温度(高温、低温)胁迫
            1.2.2.3 正负反馈
            1.2.2.4 植物激素信号途径
            1.2.2.5 植物生长发育
        1.2.3 NAC基因在杨树中相关研究
        1.2.4 NAC基因家族总结
    1.3 其它转录因子的相关研究
    1.4 研究目的与意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 实验试剂与仪器
            2.1.2.1 实验仪器
            2.1.2.2 实验试剂
        2.1.3 载体及菌株
        2.1.4 培养基及实验试剂的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 基因克隆
            2.2.1.1 RNA的提取及检测
            2.2.1.2 UTR区特异性引物设计
            2.2.1.3 cDNA的合成反应
            2.2.1.4 PCR扩增
            2.2.1.5 目标条带切胶回收
            2.2.1.6 平末端载体的连接
            2.2.1.7 菌落PCR
            2.2.1.8 质粒提取
        2.2.2 表达载体构建
            2.2.2.1 入门载体构建
            2.2.2.2 酶切反应
            2.2.2.3 超表达载体构建
        2.2.3 基因的生物信息学分析
        2.2.4 目标基因组织特异性的定量PCR分析
        2.2.5 超表达载体转化农杆菌
        2.2.6 叶盘法转化84K杨
            2.2.6.1 菌液活化
            2.2.6.2 划伤法
            2.2.6.3 打孔法
        2.2.7 叶盘法转化河北杨
3 结果与分析
    3.1 NAC基因的CDS序列克隆
        3.1.1 沙柳RNA的提取及检测
        3.1.2 目标基因的PCR扩增
        3.1.3 切胶回收产物电泳及浓度检测
        3.1.4 平末端载体连接及测序
    3.2 SpsNACs的CDS序列的生物信息学分析
        3.2.1 蛋白的理化特性分析
        3.2.2 二级蛋白结构预测
        3.2.3 三级蛋白结构预测
        3.2.4 跨膜结构分析
        3.2.5 信号肽分析
        3.2.6 系统发育树构建
        3.2.7 同源结构域分析
        3.2.8 亚细胞定位预测
        3.2.9 SpsNACs的组织特异性预测
        3.2.10 SpsNACs的miRNA预测
    3.3 SpsNAC042基因组织特异性实时定量表达分析
    3.4 SpsNACs的超表达载体构建
        3.4.1 构建入门载体
        3.4.2 酶切反应
        3.4.3 SpsNACs超表达载体构建
    3.5 SpsNACs基因的转基因
        3.5.1 SpsNACs基因超表达载体转化农杆菌
        3.5.2 农杆菌的活化培养与浸染
        3.5.3 SpsNACs基因的84K转化
        3.5.4 SpsNACs基因的河北杨转化
4 讨论
    4.1 SpsNACs命名及功能分析
    4.2 SpsNACs基因结构域及系统进化分析
5 结论、创新点、展望
    5.1 结论
    5.2 创新点
    5.3 展望
致谢
参考文献
作者简介



本文编号：4031777