羊毛硫抗生素雷可肽同源基因簇的异源表达

发布时间：2025-02-10 19:18

　　 高杰氏链霉菌中含有新型羊毛硫抗生素雷可肽(lexapeptide)的同源基因簇lxm2,为探索该基因簇相应的产物,将包含lxm2的细菌人工染色体转到变铅青链霉菌中进行异源表达,证实其可以产生雷可肽;同时还获得另一个新次级代谢产物,基因敲除实验表明此化合物的合成也与lxm2相关。通过色谱技术对新化合物进行分离纯化,结合核磁共振谱、高分辨质谱和二级质谱确定其结构为具有多重修饰的线性六肽,与雷可肽的N-端六氨基酸序列相同,命名为Lxm-N-六肽,该化合物没有检测到抗菌活性。

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【部分图文】：

图1 雷可肽的结构[13]

笔者所在课题组通过异源表达筛选娄彻氏链霉菌Sal35的基因组细菌人工染色体(BAC)文库,发现一个新型羊毛硫抗生素雷可肽(lexapeptide)。雷可肽的化学结构(图1)[13]中含有2个Dha、3个Dhb、1个Lan和1个C-端氨乙烯基甲基Cys(AviMeCys),然而测序....

图2 雷可肽同源基因簇lxm2的敲除和异源表达

分析HPLC图谱,与空载体菌株GX28/pHL931以及原始菌株高杰氏链霉菌Sgt26的发酵产物比较,在菌株GX28/4D8的HPLC图谱中还出现1个新的差异色谱峰(图2C菱形标记,保留时间为18.4min)。通过HPLC半制备分离该色谱峰对应的化合物,得到少量样品,利用液质联....

图3 Lexapeptide和Lxm-N-六肽的相对分子质量检测

图2雷可肽同源基因簇lxm2的敲除和异源表达2.3Lxm-N-六肽的分离纯化和结构鉴定

图4 Lxm-N-六肽的结构鉴定

跟踪差异峰分离纯化相应化合物,从20L发酵培养物得到白色粉末状纯品1.5mg。将纯化的样品溶于氘代试剂DMSO-d6中进行1D-和2D-NMR谱分析,NMR数据总结如表2,推测其结构为含有多重修饰的Me2-Phe-Dha-Pro-Dhb-Ile-Pro六肽(图4A),其序列与....

本文编号：4032949