草鱼unc45b基因的全长克

发布时间：2017-06-13 03:10

  本文关键词：草鱼unc45b基因的全长克隆、生物信息学分析及投喂蚕豆对该基因表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：试验一草鱼unc45b基因的全长克隆、生物信息学分析及组织差异表达UNC45b(unc-45 myosin chaperone b)是肌球蛋白的分子伴侣,在肌纤维形成过程中调控肌球蛋白(粗肌丝)的折叠、组装和积累,对维持肌节稳定和肌肉发育起着重要作用。本实验采用c DNA末端快速扩增法首次克隆获得草鱼unc45b基因全长序列,对其编码蛋白质序列的特性进行预测和分析,并采用实时荧光定量PCR法检测草鱼各组织unc45b基因的差异表达。结果表明,草鱼unc45b基因全长3163bp,含60 bp的5’端非编码区、298 bp的3’端非编码区及长2865 bp编码934个氨基酸的开放阅读框。草鱼unc45b基因编码的氨基酸序列与斑马鱼、斑点叉尾洶、墨西哥丽脂鲤、尼罗罗非鱼和大西洋鲑unc45b的氨基酸序列同源性分别达92%、86%、86%、82%和81%;生物信息学分析显示草鱼unc45b蛋白分子质量103,699.8Da,理论等电点7.39,为亲水性非分泌蛋白,不含信号肽;其二级、三级结构包括α-螺旋(α-helix)和环(loop)。组织差异表达结果显示unc45b基因在草鱼血液、肝脏、脾脏、肾脏、心脏、脑、前肠、鳃、皮肤和肌肉组织中均有表达,尤其在心脏组织中表达量最高,其次是肌肉组织,均显著高于其他组织(P0.05);在血液、肝脏、脾脏、肾脏、脑、前肠和鳃中仅极少量表达,所得结果与该基因的功能相一致。试验二脆化草鱼肌节装配相关基因unc45b的时空表达本试验以投饲配合饲料的草鱼为对照组,以干蚕豆浸泡24h后投饲的草鱼为试验组(也称蚕豆组),对两组草鱼进行为期12周的养殖,并分别于0周、4周、8周、12周采集骨骼肌、心肌、皮肤和肝脏组织,采用实时荧光定量法构建各组织unc45b基因m RNA的时空表达谱。结果表明,骨骼肌和心肌组织中unc45b基因随着养殖时间的增加表达量显著降低(P0.05),12周时表达量最低;而皮肤和肝脏组织中unc45b基因随着养殖时间的增加表达量显著增加(P0.05),12周时表达量最高,但与骨骼肌和心肌组织相比,皮肤和肝脏组织unc45b基因表达量极低。对脆化草鱼和普通草鱼0周、4周、8周、12周各组织unc45b基因表达量进行同一时期的组间比较分析,蚕豆组草鱼骨骼肌和心肌组织各时期unc45b基因的表达量显著高于对照组(P0.05);而肝脏和皮肤组织各时期unc45b基因的表达量在两组间无差异(P0.05)。所得结果表明,蚕豆和养殖周期均对unc45b基因m RNA表达量有一定影响。随养殖时间的延长普通草鱼和脆化草鱼骨骼肌、心肌、皮肤和肝脏unc45b基因m RNA表达量各自均发生了有规律的变化。同时蚕豆明显影响了骨骼肌和心肌组织unc45b基因的表达,所得结果与unc45b基因的肌节装配功能相一致,同时说明蚕豆确实影响了草鱼肉质。
【关键词】：unc45b基因 组织差异表达 QRT-PCR 草鱼 RACE 生物信息学分析 unc45b基因 蚕豆 养殖周期 组织表达
【学位授予单位】：上海海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S917.4
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-16
• 1. 普通草鱼和脆化草鱼10
• 2. 肌肉10-14
• 2.1 肌肉品质10-11
• 2.2 肌原纤维11
• 2.3 伴侣蛋白与肌节装配与降解11
• 2.4 热激蛋白 90 (Hsp90)11-12
• 2.5 Unc45蛋白12-13
• 2.6 CHIP蛋白13
• 2.7 国内外研究现状13-14
• 3. 丝裂原活化蛋白激酶 (MAP K)14-15
• 4. 本论文研究的目的、内容和意义15-16
• 4.1 草鱼unc45b基因的全长克隆、生物信息学分析及组织差异表达15
• 4.2 脆化草鱼肌节装配相关基因unc45b的时空表达15-16
• 第一章 草鱼unc45b基因的全长克隆、生物信息学分析及组织差异表达16-42
• 1. 材料与方法17-26
• 1.1 实验材料17-19
• 1.2 方法19-26
• 2．结果26-38
• 2.1 unc45b基因全长克隆与序列分析26-30
• 2.2 Unc45b氨基酸序列同源性比对和系统进化树构建30-31
• 2.3 Unc45b蛋白质结构分析31-37
• 2.4 草鱼unc45b基因的组织差异表达37-38
• 3. 讨论38-41
• 3.1 草鱼Unc45b基因与氨基酸同源性比较及系统进化树构建38-39
• 3.2 草鱼Unc45b蛋白质结构39
• 3.3 草鱼unc45b基因组织差异表达39-40
• 3.4 Unc45b蛋白功能40-41
• 4. 小结41-42
• 第二章 脆化草鱼肌节装配相关基因unc45b的时空表达42-56
• 1. 材料与方法43-47
• 1.1 材料来源43
• 1.2 养殖实验设计43-44
• 1.3 养殖管理44-45
• 1.4 样品采集45
• 1.5 实验试剂与仪器45
• 1.6 各组织总RNA的提取及反转录45
• 1.7 实时荧光定量PCR测定草鱼unc45b基因不同时期的表达45-47
• 2. 结果47-52
• 2.1 0周、4 周、8 周、12周各时间点鱼体体重47
• 2.2 定量反应体系检测47-48
• 2.3 草鱼不同组织unc45b基因的时空表达分析 (组内分析)48-50
• 2.4 蚕豆对草鱼不同组织unc45b基因表达的影响 (组间分析)50-52
• 3. 讨论52-55
• 3.1 蚕豆对草鱼生长的影响53
• 3.2 unc45b基因的功能53
• 3.3 unc45b基因表达的组织特异性53-54
• 3.4 草鱼骨骼肌和心肌组织unc45b基因的时空表达及蚕豆的促表达作用54
• 3.5 草鱼肝脏和皮肤组织 unc45b 基因的时空表达54-55
• 4. 小结55-56
• 全文总结56-57
• 参考文献57-63
• 论文发表63-64
• 致谢64

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1 胡静;草鱼unc45b基因的全长克隆、生物信息学分析及投喂蚕豆对该基因表达的影响[D];上海海洋大学;2016年

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本文编号：445581