构建携带人Sox2和EGFP基因慢病毒表达载体

发布时间：2017-06-14 11:06

  本文关键词：构建携带人Sox2和EGFP基因慢病毒表达载体，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的为了研究宫颈癌的发病机制,构建携带人Sox2基因和EGFP基因的慢病毒表达载体。方法使用限制性内切酶Sac II酶切p Lenti-EF1a-Sox2-IRES-EGFP质粒,回收线性片段并补平Sac II切口,然后Xba I酶切该线性片段,回收3.432kb目的片段便获连接用Sox2-IRES-EGFP片段;Eco RI线性化p FUGW,然后用BKL试剂盒将酶切产物补平,然后继续用Xba I酶切已线性化的p FUGW(Eco R I酶切位点已补平),获得9.122kb和819bp片段,回收9.122kb目的片段以获得连接用载体片段。最后使用DNA连接试剂盒(Ta Ka Ra)中的Solution I将连接用Sox2一IRES-EGFP(3.432kb)和连接用载体片段(9.122kb)连接,连接产物转化,次日挑选单菌落,提取质粒行酶切鉴定。所构建新载体命名为p FUSGW。获p FUSGW载体后,按Invitrogen公司所推荐的标准程序进行慢病毒包装,然后确认慢病毒是否成功生产;使用携带Sox2和EGFP基因的慢病毒感染293FT细胞和宫颈癌细胞株CC-2、CC-3以建立相应的病毒感染体系。结果经酶切鉴定证实成功构建p FUSGW,按标准程序生产的携带Sox2和EGFP基因的慢病毒上清可高效率感染宫颈癌细胞株CC-2、CC-3。结论成功构建了携带人Sox2和EGFP基因的慢病毒表达载体p FUSGW,为宫颈癌发病机制的相关后续研究奠定良好的基础。
【作者单位】： 西安医学院第二附属医院妇产科;西北工业大学医院妇科;西安交通大学第二附属医院妇产科;
【关键词】： SOX EGFP 慢病毒载体
【基金】：陕西省教育厅自然科学基金资助项目(2013JK0797)
【分类号】：R737.33
【正文快照】： 宫颈癌(cervical cancer,CC)是全球妇女第二高发恶性肿瘤,其发病率在发展中国家居首位,其发生、发展是一个多因素、多阶段、多步骤的复杂过程,与高危型HPV病毒感染、不良性行为以及生物学因素密切相关。肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)理论认为CSCs在CC的发生、发展、复发

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本文编号：449269