出生前DEHP暴露对大鼠下丘脑神经内分泌功能相关基因表达的影响

发布时间：2017-06-17 04:09

  本文关键词：出生前DEHP暴露对大鼠下丘脑神经内分泌功能相关基因表达的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:通过观察下丘脑神经内分泌功能相关基因的表达情况探讨出生前DEHP暴露对大鼠下丘脑神经内分泌功能的潜在影响及其可能的机制。方法:本研究采用SD大鼠为研究对象,32只孕鼠随机分配到4个剂量组内,即溶剂对照组(玉米油)、低剂量组(2mg/kg)、中剂量组(10mg/kg)和高剂量组(50mg/kg)。孕鼠自G14至G19,每天一次灌胃染毒。新生24h内大鼠断头处死分离下丘脑组织,液氮冷冻-80℃保存,采用双洗涤剂缓冲液系统的方法进行RNA提取,选取70日龄左右的成年大鼠,雄性大鼠断头处死,雌性大鼠在动情间期断头处死,取大脑组织,切成1mm厚的大脑切片,根据大鼠脑解剖定位图谱选择三个与生殖神经内分泌相关的三个核团,分别为前腹侧室旁核(Anteroventral periventricμlar nucleus,AVPV)和视前内侧核(medial preoptic nucleus,MPN)与弓状核(Arcuate nucleus,ARC),在三个核团区域采用直径为1.25mm的打孔针进行打孔取样,液氮冷冻-80℃保存,采用RNeasy Mini Kit(cat.74104,74106)试剂盒进行提取RNA,逆转录采用High Capacity c DNA Reverse Transcription Kits试剂盒,采用自行设计的48基因芯片Taq Man?Array Cards对神经内分泌功能相关基因表达水平进行检测。结果:1、出生前DEHP暴露对新生大鼠下丘脑神经内分泌功能相关基因表达的影响:(1)在下丘脑类固醇激素受体和共调节因子基因中,有Esr2和Cyp19a1两个基因的表达水平受到出生前DEHP暴露影响。对Esr2基因,在雄性2mg/kg和10mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05);对Cyp19a1基因,在雄性10mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05)。(2)在下丘脑神经递质受体基因中,有Drd1a、Grin2a和Mtnr1a三个基因的表达水平受到出生前DEHP暴露的影响。对于Drd1a基因,在雌性2mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著高于对照组(P0.05);对于Grin2a基因,在雄性10mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05);对于Mtnr1a基因,在雄性10mg/kg和50mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05)。(3)在下丘脑神经肽受体基因中有Kiss1r和Tacr3两个基因的表达水平受到出生前DEHP暴露的影响。对于Kiss1r基因和Tacr3基因在雄性10mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05)。(4)在下丘脑神经激素受体基因中仅有Avpr1a一个基因的的表达水平受到出生前DEHP暴露的影响。对于Avpr1a基因,在雄性10mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05);在雌性50mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著高于对照组(P0.05)。(5)在下丘脑转录调节因子基因中有Arntl,Clock,Dbp和Per2四个基因的表达水平受到出生前DEHP暴露的影响。对于Arntl基因,在雄性10mg/kg剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05);对于Clock基因,在雄性2mg/kg和10mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05);对于Dbp基因,在雄性2mg/kg和10mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05);对于Per2基因,在雄性10mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05)。2、出生前DEHP暴露对成年大鼠神经内分泌功能相关基因表达的影响:(1)在AVPV区域中有Crhr1,Drd2,Mc3r和Tacr3四个基因的表达水平受到出生前DEHP暴露的影响。在成年雄性大鼠中,Crhr1基因在2mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著高于对照组(P0.05);Drd2基因在2mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著高于对照组(P0.05);在成年雌性大鼠中,Crhr1基因在10mg/kg和50mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05);Mc3r基因在2mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05);Tacr3基因在2mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著高于对照组(P0.05)。(2)在MPN区域有Avp,Hcrtr2,Avpr1a,Crhr1,Kiss1r,和Tacr3六个基因的表达水平受到出生前DEHP暴露的影响。在成年雄性大鼠中,Avp基因在10mg/kg和50mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05);Hcrtr2基因在50mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著高于对照组(P0.05);Tacr3基因在10mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05);在成年雌性大鼠中,Avpr1a基因在10mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05);Crhr1基因在10mg/kg和50mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05);Kiss1r基因在50mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05);(3)在ARC区域中有Avp,Esr1,Ghrh,Kiss1,Npy,Pomc和Trh七个基因的表达水平受到出生前DEHP暴露的影响,且七个基因表达水平改变均集中在雄性大鼠。Avp基因在50mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著高于对照组(P0.05);Esr1基因在50mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05);Ghrh基因在50mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05);Kiss1基因在50mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05);Npy基因在10mg/kg和50mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05);Pomc基因在2mg/kg,10mg/kg和50mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著低于对照组(P0.05);Trh基因在50mg/kg DEHP剂量组其表达水平显著高于对照组(P0.05);结论:1、出生前DEHP暴露可影响新生大鼠和成年大鼠下丘脑神经内分泌功能相关基因的表达,可能会对脑的性别分化和发育产生影响。2、出生前DEHP暴露对成年大鼠AVPV、MPN和ARC区域神经内分泌功能相关基因的表达产生不同的干扰作用,可能会对成年大鼠的生殖、学习记忆、应激等神经内分泌行为产生影响作用。3、出生前DEHP暴露对大鼠神经内分泌功能相关基因表达的影响具有性别差异、剂量差异以及发育阶段差异。
【关键词】：出生前 DEHP 大鼠 下丘脑神经内分泌 基因
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R114
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 缩略语/符号说明13-15
• 前言15-18
• 研究现状、成果15-16
• 研究目的、方法16-18
• 1 对象和方法18-24
• 1.1 实验动物18
• 1.2 主要试剂18-19
• 1.3 主要仪器和设备19
• 1.4 主要试剂及配置方法19-20
• 1.5 动物处死及取材20-21
• 1.6 RNA提取和逆转录21-22
• 1.7 RT-PCR和TaqMan? Low Density Array22-24
• 1.8 统计学分析24
• 2 结果24-33
• 2.1 出生前DEHP暴露对新生大鼠下丘脑神经内分泌功能相关基因表达的影响24-28
• 2.1.1 出生前DEHP暴露对新生大鼠下丘脑类固醇激素受体和共调节因子基因表达的影响25
• 2.1.2 出生前DEHP暴露对新生大鼠下丘脑神经递质受体基因表达的影响25-26
• 2.1.3 出生前DEHP暴露对新生大鼠下丘脑神经肽受体基因表达的影响26-27
• 2.1.4 出生前DEHP暴露对新生大鼠下丘脑神经激素受体基因表达的影响27
• 2.1.5 出生前DEHP暴露对新生大鼠下丘脑转录调节因子基因表达的影响27-28
• 2.2 出生前DEHP暴露对成年大鼠神经内分泌功能相关基因表达的影响28-33
• 2.2.1 出生前DEHP暴露对AVPV核团神经内分泌功能相关基因表达的影响28-29
• 2.2.2 出生前DEHP暴露对MPN核团神经内分泌功能相关基因表达的影响29-31
• 2.2.3 出生前DEHP暴露对ARC核团神经内分泌功能相关基因表达的影响31-33
• 3 讨论33-46
• 3.1 出生前DEHP暴露对新生大鼠下丘脑神经内分泌功能相关基因表达的影响33-37
• 3.1.1 出生前DEHP暴露对新生大鼠下丘脑类固醇激素受体和共调节因子基因表达的影响33-34
• 3.1.2 出生前DEHP暴露对新生大鼠下丘脑神经递质受体基因表达的影响34-35
• 3.1.3 出生前DEHP暴露对新生大鼠下丘脑神经肽受体基因表达的影响35-36
• 3.1.4 出生前DEHP暴露对新生大鼠下丘脑神经激素受体基因表达的影响36
• 3.1.5 出生前DEHP暴露对新生大鼠下丘脑转录调节因子基因表达的影响36-37
• 3.2 出生前DEHP暴露对成年大鼠下丘脑神经内分泌功能相关基因表达的影响37-44
• 3.2.1 出生前DEHP暴露对AVPV核团神经内分泌功能相关基因表达的影响38-40
• 3.2.2 出生前DEHP暴露对MPN核团神经内分泌功能相关基因表达的影响40-42
• 3.2.3 出生前DEHP暴露对ARC核团神经内分泌功能相关基因表达的影响42-44
• 3.3 大鼠神经内分泌功能相关基因表达的剂量效应44-45
• 3.4 大鼠不同性别及不同发育阶段神经内分泌功能相关基因表达的变化45-46
• 结论46-47
• 参考文献47-59
• 发表论文和参加科研情况说明59-60
• 附录60-66
• 综述 环境内分泌干扰物的神经毒性作用66-77
• 综述参考文献71-77
• 致谢77-78
• 个人简历78

  本文关键词：出生前DEHP暴露对大鼠下丘脑神经内分泌功能相关基因表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：457316