马尔他布氏杆菌divK基因的克隆与原核表达

发布时间：2017-06-22 08:10

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【摘要】：为了克隆马尔他布氏杆菌M 5-90株divK基因并对其进行原核表达,根据GenBank中M5-90株divK基因序列,设计了1对引物;以此菌株的基因组为模板,用设计的引物扩增出了372 bp的基因片段。用凝胶回收纯化目的基因片段,并将其与pMD 20-T载体连接,转化大肠杆菌(E.coli)DH 5α后测序;测序正确后将此基因片段克隆到pET-28a(+),构建重组质粒pET28a(+)-divK;然后,把构建好的重组质粒转化入E.coli BL 21(DE3)。1 mmol/L IPTG诱导后,SDS-PAGE和Western-blot分析的结果表明,诱导表达的蛋白与目的蛋白的大小一致,说明本研究成功构建了pET28a(+)-divk原核表达载体,并在E.coli BL21中成功表达了divK基因。
【作者单位】： 海南大学农学院海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海口市动物基因工程重点实验室;海南省畜牧技术推广站;
【关键词】： 马尔他布氏杆菌 divK基因 克隆 原核表达
【分类号】：S852.614
【正文快照】： 布氏杆菌病是由布氏杆菌(Brucella)引起的一种人兽共患的细菌性传染病[1-3]。马尔他布氏杆菌病不仅给畜牧业生产造成巨大经济损失,而且引起严重的公共卫生问题,已受到越来越多的关注。马尔他布氏杆菌(B.M elitensis)是目前导致我国布氏杆菌病流行的主要菌株之一[4-5]。Div K-c

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