奶山羊ELOVL6基因启动子的克隆及活性区域分析

发布时间：2017-06-22 17:15

  本文关键词：奶山羊ELOVL6基因启动子的克隆及活性区域分析，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：超长链脂肪酸延伸酶6(elongase of very long chain fatty acids 6,ELOVL6)主要催化C12~C16饱和或单不饱和脂肪酸的延伸,是长链脂肪酸延长反应的限速酶。本研究根据云南黑山羊(Capra hircus)的基因组序列(Gene ID:NW_005100691.1)设计引物,以血液DNA为模板,利用PCR技术扩增得到西农萨能奶山羊(C.hircus)ELOVL6基因启动子的全长序列,通过缺失分析,构建了10个包含ELOVL6启动子不同缺失片段的荧光素酶报告基因载体,与海肾荧光素酶对照报告基因载体(p RL-TK)共同转染西农萨能奶山羊乳腺上皮细胞,利用双荧光素酶系统检测不同片段的启动子活性。结果表明,克隆得到ELOVL6基因启动子全长序列2 370 bp(包含转录起始位点上游2 168 bp),其与牛(Bos taurus)、人(Homo sapiens)和鼠(Mus musculus)的基因组序列同源性分别为94%、81%和80%,ELOVL6启动子上无典型的真核生物启动转录元件TATA框。缺失突变研究发现,ELOVL6基因启动子前端存在负调控元件,启动子核心区域位于转录起始位点上游109~40 bp,该序列包含过氧化酶体增殖物激活受体(peroxisom prolifeator-activated receptor,PPAR)、肝X受体(liver X receptor,LXR)、胆固醇调节元件结合蛋白-1(sterol-regulatory element binding protein-1,SREBP-1)、特异性蛋白1(specificity protein 1,Sp1)及核因子Y(nuclear factor Y,NF-Y)等转录因子的结合位点,本研究为ELOVL6基因启动子的功能研究提供理论依据。
【作者单位】： 西北农林科技大学动物科技学院/陕西省农业分子生物学重点实验室;
【关键词】： 超长链脂肪酸延伸酶(ELOVL) 启动子 基因克隆 西农萨能奶山羊
【基金】：转基因生物新品种培育项目(No.2014ZX08009-051B) 公益性行业(农业)科研专项(No.201103038) 陕西省国际科技合作重点项目计划(No.2014KW14-02)
【分类号】：S827
【正文快照】： 超长链脂肪酸延伸酶6(elongase of very longchain fatty acids 6,ELOVL6)是长链脂肪酸延长反应的限速酶(Green,Olson,2011),能够催化延长C12~C16的饱和或单不饱和脂肪酸,对C18:0和C18:1n-9的脂肪酸合成具有重要作用(Moon et al.,2014;Matsuzaka et al.,2002)。脂肪酸延伸反应

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