PLCE1基因及rs2274223和rs3765524单体型的克隆与表达

发布时间：2017-06-27 23:08

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【摘要】：目的:克隆人PLCE1基因,构建PLCE1 rs2274223和rs3765524 GT(PLCE1 Minor)和AC(PLCE1 Major)单体型真核表达重组载体,研究PLCE1基因多态性及单体型与基因表达的相关性。方法:利用重叠延伸PCR、In-Fusion技术构建PLCE1真核表达载体;基于同源重组的双点突变技术改造目的基因;利用基因转染、实时定量PCR和蛋白印迹等技术实现PLCE1表达载体在真核细胞中的过表达及表达水平的鉴定。结果:成功扩增并获得了全长6 927bp的人PLCE1 cDNA并经过DNA测序证实,与NCBI数据库PLCE1参考序列(NM_016341)比较,发现编码区3 554~3 572bp处存在18bp连续碱基插入,其余序列基本匹配。成功构建了PLCE1 Minor和PLCE1 Major两种单体型重组真核表达载体,转染细胞揭示PLCE1 Minor型的mRNA转录和蛋白质表达水平均高于Major型。结论:发现了一种新的PLCE1 mRNA转录本,成功构建了2种单体型真核表达载体;发现PLCE1 rs2274223G-rs3765524T单体型能够促进自身mRNA和蛋白质表达,为进一步揭示PLCE1 SNPs与癌症易感性的关系奠定了基础。
【作者单位】： 第四军医大学药学院;
【关键词】： 磷脂酶C-ε 单核苷酸多态性 重叠延伸PCR 基因克隆 基因表达
【基金】：国家自然科学基金(81272276) 国家重点基础研究发展规划(2010CB933902)资助项目
【分类号】：Q789
【正文快照】： 磷脂酶C-ε1(phospholipase C epsilon-1,PLCE1)是磷脂酶C家族新成员,其编码基因位于染色体10q23,主要通过不同的剪接方式编码两种异构体蛋白,分别为PLCE1a和PLCE1b,它们分别含2302和1994个氨基酸[1]。近年来研究表明,PLCE1基因与皮肤肿瘤[2]、胃癌和食道癌[3-5]的发生和发展

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