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普通小麦几丁质酶基因的克隆与表达分析

发布时间:2017-06-29 12:10

  本文关键词:普通小麦几丁质酶基因的克隆与表达分析,由笔耕文化传播整理发布。


【摘要】:几丁质酶是植物重要的防卫因子之一,与植物抗病性密切相关。为深入了解几丁质酶基因表达及功能,先利用引物ChiF/ChiR从10份具有不同抗病性的小麦中克隆出几丁质酶基因后对其进行序列分析及原核表达分析,再利用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析小麦根、茎和叶不同组织中几丁质酶基因的表达情况,并选取在小麦根、茎和叶中表达量最高的几丁质酶基因进行真菌性病害的抗性反应试验。结果表明,从10份具有不同抗病性的小麦中克隆得到5条长度约960bp的几丁质酶基因序列,其中1条序列与已公布的Chi-3基因序列(序列登录号为KJ507387)一致,其余序列命名为Cht1~Cht4(GenBank登录号为KR049247~KR049250)。序列分析表明,克隆所得序列无内含子,编码的几丁质酶属于ClassⅠb类型,也属于糖苷水解酶第19家族,是胞外分泌蛋白且兼具溶菌酶活性。SDS-PAGE分析表明,重组质粒pE-Chi能在BL21(DE3)中表达一个33kDa左右的特异蛋白。qRT-PCR分析表明,这5种几丁质酶基因在小麦根、茎和叶中均有表达,但在不同器官中表达量差异较大,其中,叶中表达量最高,根中次之,茎中最低;同时,这5种几丁质酶基因在同一器官中表达量大小具体表现为Cht4Cht2Cht3Cht1Chi-3。选取相对表达量最高的Cht4基因验证其对真菌性病害的抗性反应,结果表明,在条锈菌胁迫下,Cht4基因在抗病材料92R137中的表达量显著高于感病材料铭贤169,并且均高于同等条件下接ddH2O的表达量。本研究扩增到的几丁质酶基因在小麦中组成型表达,说明其参与了小麦的正常生长发育过程;Cht4基因的表达受条锈菌诱导,推测其可能参与了小麦叶部抗条锈菌的防御反应。
【作者单位】: 西北农林科技大学农学院;陕西省小麦新品种培育工程研究中心;
【关键词】小麦 几丁质酶 原核表达 组织表达 功能分析
【基金】:“十二五”农村领域国家科技计划项目(2011AA100501) 国家现代农业产业技术体系建设专项(CARS-3-2-47)
【分类号】:S512.1
【正文快照】: 由真菌引起的小麦病害严重影响小麦的产量和品质。而几丁质酶(EC 3.2.1.14)能够水解菌丝生长初期细胞壁中的几丁质,对真菌具有广谱抗性[1-3]。目前,已在水稻、小麦、大麦和棉花等100多种植物中检测到几丁质酶活性[4]。正常情况下,植物体内几丁质酶的含量很低,甚至不表达,但当

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1 陈爱葵;俞陆军;樊剑鸣;冯冬茹;王金发;;水稻几丁质酶基因(Oschi)cDNA的克隆及序列分析[J];中山大学学报(自然科学版);2008年02期

2 蒋昌顺,邹冬梅,张义正;几丁质酶基因及其在作物抗病育种中的应用[J];华南热带农业大学学报;2002年02期

3 金华;安晓雯;姜国斌;;羊草Class Ⅱ几丁质酶基因的克隆及序列分析[J];安徽农业科学;2009年31期

4 刘伟华,李文雄,胡尚连,徐香玲,李集临,陈正华,胡赞民;基因枪法向小麦导入几丁质酶基因的研究[J];西北植物学报;2003年01期

5 金华;安晓雯;姜国斌;;羊草Class Ⅱ几丁质酶基因的克隆及序列分析[J];Agricultural Science & Technology;2009年04期

6 黎定军,赵开军,周清明,罗宽;转几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因烟草的研究[J];湖南农业大学学报(自然科学版);2002年03期

7 张彦妮,曲敏,徐香玲,李新玲;发根农杆菌介导几丁质酶基因和β-1、3-葡聚糖酶基因转化烟草的研究[J];植物研究;2003年02期

8 王贵荣;刘敬梅;高山林;;用于中草药基因工程的双价双-T表达载体的构建[J];药物生物技术;2006年03期

9 时焦,M Naylor,M L Edwards,J I Cooper,韩锦峰;半嵌套式PCR检测转几丁质酶基因烟草研究[J];中国烟草学报;2002年02期

10 南相日;;菜豆几丁质酶基因转化马铃薯及后代表达[J];中国农学通报;2006年02期

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1 徐恩静;小麦几丁质酶基因的检测及酶活性测定[D];安徽农业大学;2011年

2 孙炳欣;人参CLASSⅢ几丁质酶基因克隆、序列分析及原核表达[D];吉林农业大学;2006年

3 冯玉兰;用于单子叶植物转化的几丁质酶基因载体构建及玉米再生体系建立[D];甘肃农业大学;2006年


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本文编号:497841

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