大鼠C-sis基因克隆及其真核表达载体的构建

发布时间：2017-07-01 03:14

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【摘要】：背景:原癌基因C-sis具有促进细胞增殖并抑制凋亡,进而促进组织修复的功能。假设C-sis可能在受损肝组织的修复和暴发性肝衰竭的治疗中发挥积极作用。目的:构建pc DNA3.1/C-sis真核表达载体,检测其在大鼠正常肝细胞株BRL细胞和在体大鼠肝脏细胞中的表达。方法:通过RT-PCR的方法克隆C-sis基因的选全长编码序列,构建pc DNA3.1/C-sis真核表达载体。鉴定无误后经脂质体介导转染到BRL细胞中,并通过将质粒注入尾静脉后导入大鼠肝脏。最后通过荧光定量PCR和Western Blot鉴定其在BRL细胞和在体大鼠肝脏细胞中的表达。结果与结论:(1)成功克隆了C-sis基因全长编码区;测序证明pcD NA3.1/C-sis重组真核表达载体构建成功;(2)将其转染至BRL细胞和在体大鼠肝脏,可使C-sis表达升高;(3)实验结果为后续研究C-sis基因对大鼠暴发性肝衰竭的影响提供了先决条件。
【作者单位】： 南昌大学第二附属医院心电诊断室;南昌大学第二附属医院消化内科;
【关键词】： 动物 模型 基因 脂质体 转染 组织工程 实验动物 基因病毒载体相关因子模型 基因克隆 C-sis 大鼠 真核表达载体 酶切 鼠尾静脉 国家自然科学基金
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81300348) 江西省青年科学基金资助项目(20151BAB215006);江西省青年科学基金资助项目(20132BAB215015)~~
【分类号】：R575.3
【正文快照】： 文章快速阅读:构建重组质粒pcD NA3.1/C-sis并检验其在大鼠肝细胞中的表达通过RT-PCR的方法克隆实验结果:C-sis基因的选全长编码序列。成功克隆C-sis基因全长编码区;鉴定证明pc DNA3.1/C-sis重组质粒经脂质体介导转通过荧光定量真核表达载体构建成功;将其转构建pc DNA3.1/C-si

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本文编号：504429