人源RAD9A基因真核表达载体的构建及其在肾癌细胞中的表达

发布时间：2017-07-03 08:07

  本文关键词：人源RAD9A基因真核表达载体的构建及其在肾癌细胞中的表达

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【摘要】：构建人源细胞周期检测点蛋白RAD9A基因真核细胞表达载体,转染至肾癌细胞786-0中,使EGFP-RAD9A融合蛋白得到高效表达。通过PCR法从293T细胞c DNA中扩增RAD9A基因编码区,经双酶切后连接入表达载体p EGFP-N1多克隆位点,并对阳性重组子进行鉴定。将p EGFPRAD9A转染至肾癌细胞786-0中,荧光显微镜观察GFP-RAD9A融合蛋白的表达及亚细胞定位,Western blot免疫印记法检测转染p EGFP-RAD9A后的肾癌细胞786-0中的融合蛋白。通过定向克隆的方法获得了含有RAD9A基因编码区的真核表达载体p EGFP-RAD9A。与对照组相比,转染p EGFP-RAD9A的肾癌786-0细胞中高效表达了EGFP-RAD9A融合蛋白,后者定位在786-0的细胞核。构建的RAD9A基因重组真核表达载体能够在肾癌细胞786-0中高效表达,为研究RAD9A在肾癌发生发展中的作用奠定了基础。
【作者单位】： 湖北理工学院肾脏疾病发生与干预湖北省重点实验室;
【关键词】： 周期检测点蛋白RADA 定向克隆 真核细胞表达载体 肾癌
【基金】：湖北理工学院大学生科技创新项目(项目编号:201510920019);湖北理工学院人才引进项目(项目编号:16xjz08R) 湖北省教育厅科学技术研究计划青年人才项目(项目编号:000713)
【分类号】：R737.11;Q78
【正文快照】： 人源RAD9A(RAD9 checkpoint clamp com-ponent A)基因定位于人染色体11 q13.1~q13.2,是裂殖酵母RAD9的同源基因,作为细胞周期检测点蛋白对细胞周期阻滞和DNA损伤修复具有重要意义[1-3]。这种蛋白具有3'到5'核酸外切酶活性,因此它的功能主要是切除和修复DNA损伤。在哺乳动物中,

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