中华蜜蜂信息素结合蛋白OBP10的基因克

发布时间：2017-07-03 10:12

  本文关键词：中华蜜蜂信息素结合蛋白OBP10的基因克隆、原核表达和配基结合特性分析

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【摘要】：【目的】气味结合蛋白在中华蜜蜂Apis cerana cerana嗅觉系统中起到重要作用,本实验拟研究中华蜜蜂一个新的信息素结合蛋白OBP10及其与蜜蜂信息素以及蜜源开花植物挥发物的结合特性。【方法】本实验通过RT-PCR扩增获得OBP10基因全长(Gen Bank登录号:KP717060.1),以p ET-30a构建原核表达载体,并以Ni2+琼脂糖柱进行重组蛋白表达和分离纯化,在N-苯基-1-萘胺(N-phenyl-1-naphthylamine,1-NPN)作为荧光报告子下利用荧光光谱法体外研究重组Acer OBP10与多种候选化学配基的结合特征。【结果】经多序列联配分析,发现Acer OBP10的多个同源基因均为信息素结合蛋白(pheromone binding proteins,PBPs)。配基结合特性分析显示,Acer OBP10对14种候选配基中的蜂王信息素成分对羟基苯甲酸甲酯(HOB)竞争力最大,相对荧光可降至6.06%,解离常数11.04μmol/L;进一步表明Acer OBP10属于一个新的中蜂PBPs。此外,Acer OBP10也能和包括工蜂信息素(香叶醇和橙花醇)、报警信息素(2-庚酮和乙酸异戊酯)等蜜蜂信息素以及蜜源开花植物挥发物之一的β-紫罗兰酮结合,表明Acer OBP10可能是一种以信息素结合为主的多功能结合蛋白。【结论】Acer OBP10是中蜂一个新的信息素结合蛋白,与此前我们鉴定的蜂王信息素结合蛋白Acer ASP1相比,Acer OBP10对蜜蜂信息素的结合谱更为广泛,这些结果将对进一步研究中华蜜蜂信息素识别和传递提供理论基础,对于深入了解中华蜜蜂嗅觉影响生理功能的行为机制具有重要意义。
【作者单位】： 中国计量学院生命科学学院浙江省生物计量及检疫检验重点实验室;
【关键词】： 中华蜜蜂 信息素结合蛋白 信息素 荧光竞争 结合特性
【基金】：国家自然科学基金项目(31372254) 中国博士后科学基金(2014M560488,2015T80624) 杭州市科技计划项目(20140432B12)
【分类号】：Q966
【正文快照】： Molecular cloning,prokaryotic expression and lignand-bindingcharacterization of a novel pheromone binding protein OBP10 in Apiscerana cerana(Hymenoptera:Apidae)灵敏的嗅觉系统在昆虫觅食、寻偶、交配、种群管理等活动中发挥至关重要的作用。其中气味结合蛋白(odo

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