表面展示棉铃虫钙粘蛋白基因细胞系的建立

发布时间：2017-07-05 13:14

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【摘要】：为研究苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)杀虫晶体蛋白与其受体钙粘蛋白的相互作用,本研究利用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,Ac MNPV)囊膜蛋白GP64细胞膜锚定的特点,将172 bp的N端信号肽(GP64 signal peptide,gp64sp)和135 bp的C端膜锚定区域(GP64 C-terminal transmembrane domain,gp64ctd)连接,并在中间添加了一段含有6个酶切位点的序列,再连接到表达载体p IZ/V5-His,成功构建了一个使外源基因在细胞膜上表达的重组载体p IZ/V5-gp64。将扩增的3 882 bp的棉铃虫钙粘蛋白(Helicoverpa armigera cadherin,HaCAD)基因重复区和近膜区片段与重组载体p IZ/V5-gp64进行酶切和连接,构建重组载体p IZ/V5-gp64-HaCAD,将其转染棉铃虫细胞系Ha-E-1,通过筛选、细胞克隆和PCR验证,获得了重组钙粘蛋白基因的转基因细胞系Ha-T-CAD。免疫荧光法检测证实,钙粘蛋白在转基因细胞系Ha-T-CAD中成功表达。Western blot检测发现,在Ha-T-CAD细胞的膜蛋白中有140 k D大小的钙粘蛋白。转基因细胞系Ha-T-CAD的构建将为Bt杀虫晶体蛋白作用机理以及昆虫对Bt毒素的抗性机制研究提供基础资料。
【作者单位】： 青岛农业大学农学与植物保护学院/山东省植物病虫害综合防控重点实验室;中国农业科学院植物保护研究所/植物病虫害生物学国家重点实验室;
【关键词】： 钙粘蛋白 棉铃虫 转基因细胞系 GP蛋白 蛋白表达
【基金】：国家自然科学基金(No.31272376) 植物病虫害生物学国家重点实验室开放基金(No.SKLOF201315) 山东省“泰山学者”建设工程专项
【分类号】：S433
【正文快照】： 苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)可产生具有杀虫活性的晶体蛋白(或晶体毒素),这些蛋白常被作为生物杀虫剂直接施用或在转基因作物中表达而广泛应用(Bravo et al.,2011;Sanahujaet al.,2011)。我国自20世纪90年代广泛种植转Bt基因抗虫棉(Gossypium hirsutum)后,较好

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本文编号：522110