人Irisin基因的克

发布时间：2017-07-14 03:23

  本文关键词：人Irisin基因的克隆、原核表达及重组蛋白的纯化

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【摘要】：鸢尾素(Irisin)是新发现的一种肌肉因子,其前体是Ⅲ型纤连蛋白组件包含蛋白5(fibronectin typeⅢdomain-containing protein 5,FNDC5)。为实现人(Homo sapiens)Irisin的原核表达,通过反转录PCR得到人肌肉组织总RNA的c DNA,并以特异性引物扩增得到人FNDC5基因的c DNA序列。以特异性引物扩增将人Irisin基因序列引入NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点,经双酶切后插入原核表达载体p ET-30a中,构建重组质粒并转化大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)p Lys S。通过异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl dulfate polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)检测,用镍柱纯化目的蛋白,并用Western blot方法鉴定。DNA序列分析结果显示,克隆的人Irisin基因序列和NCBI公布的序列一致,并成功构建了p ET-30a-Irisin重组表达载体;SDS-PAGE电泳检测和Western blot结果表明,表达蛋白分子量约为14 k D,与预期大小一致;实现了人Irisin的可溶性表达,得到了较高纯度的目的蛋白,为进一步研究人Irisin蛋白的结构、功能及应用提供了理论依据。
【作者单位】： 常熟理工学院生物与食品工程学院;中国矿业大学化工学院;
【关键词】： 鸢尾素(Irisin) 基因克隆 原核表达 蛋白纯化
【基金】：国家自然科学基金(No.31472091) 江苏省自然科学基金(No.BK20151257)
【分类号】：Q78
【正文快照】： 鸢尾素(Irisin)是Spiegelman实验室于2012年在人(Homo sapiens)和小鼠(Mus musculus)的体内所发现的一种新的肌肉因子(Bostr?m et al.,2012),是蛋白水解酶剪切Ⅲ型纤连蛋白组件包含蛋白5(fi-bronectin typeⅢdomain-containing protein 5,FNDC5)之后所形成的可分泌多肽片段(Te

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