桂花C4H基因的克隆与表达特性分析

发布时间：2017-07-15 08:09

  本文关键词：桂花C4H基因的克隆与表达特性分析

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【摘要】：利用转录组测序获得的表达序列信息,结合RACE技术,从桂花(Osmanthus fragrans)花瓣中克隆到两个参与苯丙烷代谢第2步反应的肉桂酸 4 羟基化酶(C4H)基因。其ORF全长分别为1 518 bp和1 611 bp,各自编码505和536个氨基酸,命名为OfC4H1和Of C4H2(登录号分别为KR861466、KF254842)。系统进化树表明,OfC4H1与矮牵牛中的PhC4H1、PhC4H2等C4H蛋白聚为一类,属于ClassⅠ类型;OfC4H2与金银花中的LjC4H等属于ClassⅡ类型。进一步的C4H蛋白序列多重比较发现,OfC4H1和OfC4H2蛋白具有该基因家族特有的保守结构域,在这些保守结构域中存在区别两类C4H蛋白的典型特征。利用Real-time PCR比较分析了OfC4H1和OfC4H2基因的时空表达模式,结果显示,Of C4H1在花瓣中的表达量最高;OfC4H2在花瓣中的表达量较低,在花梗、雌蕊和幼叶等组织中表达量较高。构建原核表达载体pET6xHN-C4Hs,转化Transetta(DE3)大肠杆菌并诱导表达的结果表明,目的蛋白能在原核表达系统中顺利表达,而且与预期大小一致,但因溶解度较低无法进行酶活性分析。
【作者单位】： 华中农业大学园艺植物生物学教育部重点实验室;
【关键词】： 桂花 肉桂酸 羟基化酶 黄酮类化合物 原核表达 基因表达
【基金】：教育部博士点基金项目(20130146110022) 黄冈师范学院项目(2015TD02)
【分类号】：S685.13
【正文快照】： 桂花(Osmanthus fragrans)具有很高的观赏价值,食用价值和药用价值。根据花色的不同,桂花被划分为银桂品种群、金桂品种群和丹桂品种群(向其柏和刘玉莲,2008)。类胡萝卜素的积累导致桂花的花色加深。目前有关类胡萝卜素组分及其生物合成分子机制的研究已有报道(Han et al.,201，

本文编号：543027