家蚕BmBrat基因的克隆与鉴定

发布时间：2017-07-15 10:21

  本文关键词：家蚕BmBrat基因的克隆与鉴定

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【摘要】：NHL家族蛋白具有调控细胞增殖与分化的功能,在哺育动物中被广泛研究。本文克隆得到家蚕NHL蛋白家族成员BmBrat基因,通过RACE技术获得该基因cDNA全长序列为3 614 bp,其ORF为2 580 bp,编码859个氨基酸,预测其蛋白分子量为94.3 kDa,等电点为6.65。利用RT-PCR技术检测其在五龄3 d家蚕各组织表达情况,结果表明其在幼虫各组织均有表达,包括丝腺、中肠、脂肪体、马氏管等,且卵巢和头部表达量最高;胚胎时期表达谱分析显示其在胚胎发育第4天和第5天有高量表达。经原核表达、蛋白纯化及免疫小鼠后获得家蚕BmBrat多克隆抗体,且Western blotting及免疫荧光检测显示该抗体可以特异检测家蚕BmBrat蛋白;免疫荧光结果表明BmBrat蛋白定位于家蚕血细胞胞质中,为进一步研究BmBrat基因的生物学功能奠定了基础。
【作者单位】： 西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室;
【关键词】： 家蚕 BmBrat基因 表达谱 抗体制备 亚细胞定位
【基金】：国家自然科学基金(No.81201551) 高等学校博士学科点专项科研基金(No.20130182110003) 重庆市科委自然科学院士基金(No.CSTC2013jcyjys0007) 中央高校基本科研业务费专项资金(Nos.XDJK2013B020,SWU111014)资助~~
【分类号】：Q78
【正文快照】： NHL家族的名字源于发现的3 个成员:NCL-1、HT2A和LIN-41,这3 个因子与RNA代谢有关系,可能参与转录后基因的表达调控[1]。研究表明,NHL家族的成员均含有3 个保守的基序:1 个RING、1 个或是2 个B-box和1 个coiled-coil [2]。在调节Brat (Brain tumor) 蛋白的活性中NHL结构起了至

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本文编号：543468