家蝇GAPDH基因的克

发布时间：2017-07-15 10:22

  本文关键词：家蝇GAPDH基因的克隆、表达及作为内参的可靠性分析

  更多相关文章： 家蝇 GAPDH基因 克隆表达 内参基因

【摘要】：目的探讨家蝇甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因在不同饲料饲养、不同发育期及不同组织的转录和表达情况,评价其作为家蝇功能基因研究内参的稳定性。方法运用PCR技术扩增GAPDH基因完整编码序列,生物信息学方法预测该基因及其编码蛋白功能。构建pET-28a(+)-GAPDH重组质粒,转化到大肠埃希菌Transetta(DE3)中进行诱导表达,纯化重组蛋白制备多克隆抗体。运用Real-time PCR和Western blot检测家蝇不同发育期、三龄幼虫不同组织和不同饲养物处理下GAPDH基因的表达情况。结果家蝇GAPDH基因ORF全长999bp,编码332个氨基酸,理论分子质量37.3ku,等电点为8.57,具有GAPDH家族的蛋白保守结构域;构建的重组质粒经PCR及测序鉴定正确;SDS-PAGE分析显示重组质粒在Transetta(DE3)中表达,纯化后的表达产物与目的蛋白大小相符,Western blot显示该蛋白可被相应血清识别;Real-time PCR分析GAPDH基因在不同饲料饲养3龄幼虫、不同发育期均保持较好的转录稳定性,同时,Western blot分析GAPDH分子在家蝇不同发育期及3龄幼虫不同组织中均有表达,且表达量无明显差别。结论 GAPDH基因在不同发育期、不同组织及不同饲养物饲养的家蝇表达稳定,可作为家蝇可靠性内参基因使用。
【作者单位】： 贵州医科大学基础医学院;贵州医科大学生物与工程学院;
【关键词】： 家蝇 GAPDH基因 克隆表达 内参基因
【基金】：国家科技支撑计划项目(No.2011BAC06B12) 国家自然科学基金项目(No.81360254) 贵州省高等学校创新能力提升计划项目(No.07060151306) 贵阳医学院院基金项目(合同字第009号)
【分类号】：R384.2;Q78
【正文快照】： ***家蝇(Musca domestica)属昆虫纲、双翅目、家蝇科,为世界性卫生害虫[1]。家蝇对恶劣环境具有极强的适应力,其先天性免疫系统和调控机制是研究的热点,分子生物学技术也随之成为家蝇功能分子和免疫机制研究的主要手段。家蝇营养丰富,含多种活性物质,这些功能分子已成为农业、

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 杨剑;张大川;梁树坚;林政炯;;Crystallographic Studies of Molecular Asymmetry of Activesite Carboxymethylated GAPDH[J];Chinese Science Bulletin;1993年12期

2 李洁;谢文光;沈倍奋;邵宁生;;GAPDH功能多样性研究进展[J];军事医学科学院院刊;2006年05期

3 尚海旭;井然;贾弘y，

本文编号：543474