嗜热菌β-葡萄糖苷酶A基因的克隆表达及转化大豆异黄酮糖苷

发布时间：2017-07-17 04:19

  本文关键词：嗜热菌β-葡萄糖苷酶A基因的克隆表达及转化大豆异黄酮糖苷

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【摘要】：对嗜热厌氧乙醇菌(Thermoanaerobacter ethanolicus)JW200基因组DNA中β-葡萄糖苷酶A基因(Te-BglA)进行PCR扩增,构建重组质粒pET-20b-Te-BglA,并对纯化的重组酶Te-BglA的酶学性质和动力学参数进行研究。结果表明,基因Te-BglA在Escherichia coli细胞中成功表达,获得重组酶Te-BglA,该酶的最适温度和p H值分别为80℃和7.0。以对硝基苯酚-β-葡萄糖苷(pNPG)为底物时,K_m值为(0.78±0.02)mmol/L,K_(cat)/K_m值为(6.86±0.16)×10~4 L/(mol·s);以天然底物水杨苷为底物时,K_m值为(5.18±0.10)mmol/L,K_(cat)/K_m值为(2.04±0.02)×10~4 L/(mol·s),两者比较可知,重组酶Te-BglA表现出对pNPG更好的亲和力和更高的催化效率常数。该酶在80℃保温1 h后相对于冰浴中(未保温)的酶活仍有70.1%的残留,在pH 4.5~8.0区间仍保持较高的pH稳定性。酶解大豆粉的结果表明,重组酶Te-BglA在80℃作用3 h后,大豆黄素和染料木素的产量分别达到35.9 mg/g和59.1 mg/g。
【作者单位】： 信阳农林学院生物与制药工程学院;南京师范大学金陵女子学院;
【关键词】： β-葡萄糖苷酶 酶学性质 大豆异黄酮糖苷 苷元
【基金】：河南省科技攻关资助项目(132102110047)
【分类号】：Q78
【正文快照】： 大豆异黄酮因具有抗肿瘤作用、缓解更年期综合征、理想的转化途径[7-9]。虽有很多来源于细菌或真菌转化大豆抗辐射、延缓衰老等功效而成为国内外研究热点[1-3]。目前异黄酮糖苷β-葡萄糖苷酶的报道,但有关耐热性高效水解研究发现的12种大豆异黄酮根据结构的不同分为两大糖苷的

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