弓形虫ROP21基因的原核表达与免疫学鉴定

发布时间：2017-07-27 09:09

  本文关键词：弓形虫ROP21基因的原核表达与免疫学鉴定

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【摘要】：目的原核表达弓形虫棒状体ROP21基因,并对rROP21蛋白进行免疫学鉴定。方法根据已发表的ROP21基因序列设计引物,通过RT-PCR方法扩增弓形虫RH株的ROP21基因。将ROP21基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)后转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达目的蛋白,纯化后进行SDS-PAGE分析、Western blot及IFA分析。结果经PCR和酶切鉴定,成功构建重组表达载体。重组质粒转化BL21(DE3)后经IPTG诱导,重组蛋白(rROP21)以包涵体形式高效表达,分子质量单位约为45ku。Western blot显示重组rROP21蛋白能被his标签抗体及弓形虫病患者血清识别。用rROP21免疫小鼠,获得滴度为1∶104的抗体血清。IFA显示弓形虫速殖子体内存在ROP21蛋白。结论构建的重组质粒pET28a-ROP21表达的弓形虫rROP21具有抗性,可作为血清学诊断候选抗原,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
【作者单位】： 山东省医学科学院山东省寄生虫病防治研究所;临沂市畜牧局;平邑县畜牧局;
【关键词】： 弓形虫 棒状体蛋白 原核表达 Western blot 纳虫空泡
【基金】：国家自然科学基金青年项目(No.31502057)
【分类号】：R382.5
【正文快照】： *?**?刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种重要的人畜共患细胞内寄生原虫,能感染哺乳动物、鸟类等所有温血动物[1]。弓形虫病呈世界性分布,全球平均人群感染率为20%~30%,我国人群感染率为5%~20%[2-4]。近年来宠物饲养数量增多,使得弓形虫感染率呈逐年上升趋势,但目前仍缺少治

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1 卢慎;先天性弓形虫病脑积水的病理学研究[J];临床与实验病理学杂志;1986年04期

2 张述义,于恩庶;我国弓形虫体外培养的研究进展[J];中国人兽共患病杂志;1992年04期

3 蒋早立,解中坚;弓形虫病的实验治疗研究概况[J];国外医学(寄生虫病分册);1992年05期

4 王宝麟;;弓形虫染色体的研究 弓形虫染色体标本制备方法的探讨(一)[J];贵州医药;1992年06期

5 毛飞，

本文编号：580662