肝移植患者外周血中药物代谢酶基因表达的研究

发布时间：2017-08-07 09:01

  本文关键词：肝移植患者外周血中药物代谢酶基因表达的研究

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【摘要】：目的:研究肝移植患者术后外周血中药物代谢酶基因表达情况,探究在肝移植术后将检测药物代谢酶基因表达量应用于预测肝损伤,从而进一步指导临床用药。方法:选取2013年10月~2014年4月在天津市第一中心医院进行肝移植的患者64例,64例患者均采用三联免疫抑制治疗方案。采集患者术后三周的外周血,对收集到的临床数据采用非线性混合效应模型(Nonlinear Mixed Effect Model,NONMEM)进行分析,发现他克莫司的清除率主要受总胆红素、血红蛋白、术后时间、血尿素氮的影响,除了上述指标外还将白蛋白、总蛋白指标纳入研究。首先从术后三周的样本中筛选出8例,根据他克莫司不同的血药浓度分为两组:血药浓度高组和血药浓度低组;提取外周血中RNA逆转成c DNA,采用RT2Profiler PCR Array筛查两组差异表达的基因;采用64例样本验证RT2 Profiler PCR Array结果;采用重组人源CYP酶实验验证表达发生变化的基因与免疫抑制剂的代谢关系;采用i MLDR技术对与抑制剂代谢有关的药物代谢酶进行基因分型。结果:(1)对研究人群术后三周的临床数据进行统计分析,发现谷丙转氨酶、谷氨酰转移酶、总胆红素的浓度异常,说明肝脏存在损伤。上述指标与他克莫司进行相关性分析,发现总胆红素浓度与他克莫司血药浓度成负相关(r=-0.300,P0.05)。(2)采用三种RT2 Profiler PCR Array检测他克莫司血药浓度高组与血药浓度低组差异表达基因,通过分析共发现29个差异表达基因(差异倍数1.5,P0.05),相比于血药浓度高组,29个差异表达基因在血药浓度低组表达量均升高。(3)本研究筛选出的29个基因来自细胞色素P450酶系、乙醛脱氢酶系、乙醇脱氢酶系、酯酶系、前列腺素-内过氧化物合成酶系、黄嘌呤脱氢酶系、脱羧酶系、谷胱甘肽转移酶系、N-乙酰转移酶系、磺基转移酶系,29个基因中12个属于P450酶系,说明P450酶系的酶变化更明显。(4)采用64例样本对RT2 Profiler PCR Array结果进行验证,得出6个有意义的基因,分别为CYP1A1、CYP3A5、CYP2B6、CYP4A11、CYP17A1、CYP19A1,6个基因都属于P450酶系。相比于他克莫司血药浓度高组,6个基因在血药浓度低组表达量均升高,与RT2 Profiler PCR Array结果一致。分别将各基因表达量与他克莫司血药浓度进行相关性分析发现CYP3A5(r=-0.381,P0.05)、CYP4A11(r=-0.331,P0.05)、CYP2B6(r=-0.339,P0.05)与他克莫司血药浓度呈负相关。(5)三种免疫抑制剂(他克莫司、吗替麦考酚酯、甲基强的松龙)分别与5个重组人源P450酶(CYP1A1、CYP3A5、CYP2B6、CYP4A11、CYP17A1)孵育,应用HPLC-MS法测定孵育液中免疫抑制剂的剩余量。结果证明CYP3A5参与他克莫司的代谢转化,CYP17A1参与吗替麦考酚酯的代谢转化。(6)采用i MLDR技术对CYP17A1基因的6个SNP位点进行基因分型,通过统计分析发现CYP17A1的rs17115149位点的G/G基因型的表达量比G/T基因型的表达量低(P0.05)。其他几个SNP位点不同的基因型表达量没有统计学差异。结论:肝移植患者术后他克莫司血药浓度与外周血中CYP1A1、CYP3A5、CYP2B6、CYP4A11、CYP17A1、CYP19A1的基因表达量相关,六个基因的表达量可以反应患者肝脏损伤情况和患者体内药物代谢酶水平;CYP3A5是代谢他克莫司的主要酶;CYP17A1可以代谢吗替麦考酚酯;rs17115149基因多态性可能影响CYP17A1的转录水平。
【关键词】：肝移植 药物代谢酶基因表达 重组酶 基因多态性 SNP分型
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R657.3
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略语11-13
• 前言13-16
• 研究现状、成果13-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、实验样本采集与筛选16-20
• 1.1 实验材料与方法16
• 1.1.1 研究对象16
• 1.1.2 临床给药方案16
• 1.1.3 外周血样本的采集16
• 1.1.4 患者基本资料收集16
• 1.1.5 统计方法16
• 1.2 实验结果16-20
• 1.2.1 术后肝移植样本临床资料16-17
• 1.2.2 临床数据统计结果17-18
• 1.2.3 实验样本的筛选18
• 1.2.4 小结18-20
• 二、肝移植患者外周血RT2Profiler PCR Array筛查20-30
• 2.1 概述20
• 2.2 实验材料与方法20-25
• 2.2.1 主要试剂20-21
• 2.2.2 常用液体的配制21
• 2.2.3 主要仪器21-22
• 2.2.4 实验方法22-25
• 2.3 实验结果25-27
• 2.3.1 荧光定量PCR扩增结果25
• 2.3.2 检测血药浓度高组和血药浓度低组差异表达基因25-26
• 2.3.3 血药浓度高组和血药浓度低组两组差异表达基因汇总26-27
• 2.3.4 差异表达基因的功能分析27
• 2.4 讨论27-30
• 2.4.1 药物的代谢反应27-28
• 2.4.2 差异表达基因功能分析28-29
• 2.4.3 小结29-30
• 三、64例样本验证RT2 Profiler PCR Array结果30-39
• 3.1 概述30
• 3.2 研究对象和方法30-32
• 3.2.1 研究对象30
• 3.2.2 实验材料30
• 3.2.3 主要仪器30
• 3.2.4 实验方法30-32
• 3.3 实验结果32-33
• 3.4 讨论33-37
• 3.4.1 他克莫司的免疫抑制作用33-34
• 3.4.2 药物代谢酶的功能34-35
• 3.4.3 功能分析35-37
• 3.5 小结37-39
• 四、重组酶实验39-50
• 4.1 实验材料与方法39-41
• 4.1.1 实验材料39
• 4.1.2 实验仪器39-40
• 4.1.3 实验方法40-41
• 4.2 实验结果41-47
• 4.2.1 吗替麦考酚酯与四种药物代谢酶反应的结果41-43
• 4.2.2 他克莫司与五种药物代谢酶反应的结果43-44
• 4.2.3 甲基强的松龙与四种药物代谢酶反应的结果44-45
• 4.2.4 重组酶实验发现代谢吗替麦考酚酯的新酶45-46
• 4.2.5 分析吗替麦考酚酯被CYP17A1代谢的产物46-47
• 4.3 讨论47-49
• 4.4 小结49-50
• 五、CYP17A1基因SNP分析50-59
• 5.1 概述50
• 5.2 实验材料与方法50-55
• 5.2.1 实验材料50-51
• 5.2.2 仪器设备51-52
• 5.2.3 实验方法52-55
• 5.3 实验结果55-57
• 5.3.1 CYP17A1基因SNP分型结果55-56
• 5.3.2 CYP17A1定量结果与基因型的关系56-57
• 5.4 讨论57-58
• 5.5 小结58-59
• 结论59-60
• 参考文献60-66
• 发表论文和参加科研情况说明66-67
• 综述 常用免疫抑制剂与药物代谢酶基因组学研究现状67-82
• 综述参考文献75-82
• 致谢82-83
• 个人简历83

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本文编号：633791