番茄GST-L3基因遗传转化及ARF基因在青枯病发生过程中的表达分析

发布时间：2017-08-10 04:00

  本文关键词：番茄GST-L3基因遗传转化及ARF基因在青枯病发生过程中的表达分析

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【摘要】：青枯病是在番茄栽培过程中的一种主要病害,在我国南方湿热多雨的季节发病非常严重,采用化学防治和生物防治效果不理想,抗病育种是防治青枯病最经济有效的方法,而抗病机理研究有助于制定抗病育种策略。本研究分为两部分,一是在以前证明GST-L3参与番茄抗青枯病反应的研究基础上,利用农杆菌介导的转基因方法验证该基因功能;其次,利用半定量技术,分析番茄生长素响应因子ARF在感、抗品种接种青枯菌后时空表达差异。论文的主要研究结果如下:1.在番茄离体再生体系中分化培养基的最佳激素组合是MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.8mg/L,生根培养基的最佳IAA浓度为0.5mg/L;在番茄的遗传转化体系中最佳预培养时间为2d,最佳共培养时间为2d,筛选抑制剂卡那霉素最佳浓度为50mg/L。2.利用农杆菌介导法成功地将GST-L3基因导入感病番茄中,对转基因植株接种鉴定结果表明:和野生型相比,转基因番茄病害症状出现时间延缓,证明GST-L3参与了番茄的抗青枯病反应,主要参与前期的抗病反应。3.利用外源喷施IAA的方法发现IAA在番茄抗青枯病反应中具有负调控作用,增加了番茄的感病性;利用生物信息学的方法从番茄基因组中鉴别到22个ARF基因,利用RT-PCR技术分析了抗、感材料在接种青枯菌后ARF基因的表达情况。
【关键词】：番茄 谷胱甘肽S转移酶基因 遗传转化 生长素响应因子
【学位授予单位】：华南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S436.412.15
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-5
• 本文缩略词及中英文对照5-8
• 1. 前言8-15
• 1.1 番茄青枯病8-10
• 1.1.1 番茄青枯病的概述8
• 1.1.2 番茄青枯病的发病症状8
• 1.1.3 番茄青枯菌的致病机理8-9
• 1.1.4 番茄对青枯病的抗性机制9-10
• 1.2 GSTs的研究进展10-12
• 1.2.1 GSTs的分类10-11
• 1.2.2 GSTs的结构11
• 1.2.3 GSTs的在植物中的作用11-12
• 1.3 生长素信号途径与植物的抗病反应12-14
• 1.3.1 生长素在植物抗病反应中的作用12-13
• 1.3.2 生长素响应因子ARF的作用机制13-14
• 1.4 本研究的目的及意义14-15
• 2 材料与方法15-25
• 2.1 材料15-16
• 2.1.1 试验材料15
• 2.1.2 主要的药品、试剂及试剂盒15
• 2.1.3 主要培养基及试剂的配制15-16
• 2.2 实验方法16-25
• 2.2.1 番茄再生体系的优化16-17
• 2.2.2 番茄遗传转化体系的优化17
• 2.2.3 感病材料‘M82’的遗传转化17-18
• 2.2.4 转基因植株的PCR鉴定18-19
• 2.2.5 T_1学转基因植株的抗性鉴定19-20
• 2.2.6 外源生长素处理对番茄青枯病抗性的影响20
• 2.2.7 生长素响应因子ARF家族鉴定20
• 2.2.8 番茄抗、感材料接种青枯菌后ARF的表达分析20-25
• 3 结果与分析25-39
• 3.1 番茄再生体系的优化25-27
• 3.1.1 不同的激素配比对番茄子叶分化的影响25-26
• 3.1.2 IAA浓度对番茄外植体生根的影响26-27
• 3.2 番茄转化体系的优化27-28
• 3.2.1 预培养时间对遗传转化的影响27
• 3.2.2 农杆菌与番茄子叶共培养时间对遗传转化的影响27
• 3.2.3 卡那霉素浓度对番茄子叶转化的影响27-28
• 3.3 转基因植株的获得和PCR鉴定28-30
• 3.4 T_1学转基因植株的青枯病抗性鉴定30
• 3.5 外源IAA对番茄抗青枯病的影响30-31
• 3.6 番茄总RNA质量分析31
• 3.7 生长素响应因子（ARF）氨基酸序列鉴定和生物信息学分析31-35
• 3.7.1 ARF理化性质分析表31-32
• 3.7.2 ARF保守结构域分析及聚类分析32-35
• 3.8 ARF基因的半定量分析35-39
• 4 讨论39-42
• 4.1 影响遗传转化效率的因素讨论39-40
• 4.2 转GST-L3基因番茄对青枯病的抗性40
• 4.3 生长素及生长素响应因子在抗病中的作用40-42
• 致谢42-43
• 参考文献43-46

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 马立功;孟庆林;张匀华;刘志华;王志英;;向日葵谷胱甘肽-S-转移酶基因的克隆及抗病功能研究[J];中国油料作物学报;2015年05期

2 李倩;王滨;李培环;王富;董晓颖;段艳欣;;番茄子叶和下胚轴离体再生体系的建立[J];北方园艺;2015年01期

3 汪国平;褚梦;孔杰;陈馥莹;陈煜;赵亚华;;番茄青枯病抗性两个相关基因功能的初步鉴定[J];园艺学报;2014年06期

4 贺玺强;徐恒戬;赵汝凤;;番茄遗传转化影响因素及其应用研究进展[J];北方园艺;2013年20期

5 陈秀华;王臻昱;李先平;朱延明;刘丽;陈威;陈勤;;谷胱甘肽S-转移酶的研究进展[J];东北农业大学学报;2013年01期

6 方佳;何勇清;余敏芬;郑炳松;;植物生长素响应因子基因的研究进展[J];浙江农林大学学报;2012年04期

7 裴冬丽;;谷胱甘肽还原酶在植物防御中的研究进展[J];中国农学通报;2012年18期

8 黄真池;刘媛;曾富华;卢向阳;;青枯菌致病机理及作物抗青枯病研究进展[J];热带亚热带植物学报;2008年05期

9 高媛媛;余文贵;赵统敏;张保龙;倪万潮;何晓兰;姚姝;;抗菌肽Cecropin B基因导入番茄提高青枯病抗性[J];江苏农业学报;2007年06期

10 李晓东,刘敬梅,陈杭,程智慧,柴敏;甜蛋白基因MBLII对番茄的遗传转化[J];西北植物学报;2004年05期

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本文编号：648706