转染Jumonji基因致心衰犬血清TGF-β1和CTGF动态变化的研究

发布时间：2017-08-23 14:23

  本文关键词：转染Jumonji基因致心衰犬血清TGF-β1和CTGF动态变化的研究

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【摘要】：目的:探讨转染Jumonji基因导致心衰犬血清中TGF-β1和CTGF动态变化机制。方法:实验比格犬采用随机分组方法,随机分为假手术组(A组):仅植入起搏器,不行右心室快速持续起搏刺激。将造模成功的心衰犬随机分为2个亚组(B组和C组),每组6只。心衰+AAV9-EGFP组(B组):心衰犬经胸腔心包腔内注射500μL EGFP(绿色荧光蛋白,滴度1×1012 vg)基因的腺相关病毒溶液后,再继续行右心室快速起搏14天。心衰+AAV9-Jumonji-EGFP组(C组):心衰犬经胸腔心包腔内注射500μL携带Jumonji基因的腺相关病毒溶液(滴度1×1012 vg)后,再继续行右心室快速起搏14天。持续快速右心室起搏心衰犬模型造模成功后,测量左室射血分数(Left Ventricular Ejection Fraction,LVEF)、心衰标准平均动脉压(mean artery pressure,MAP),测定两组心肌HE染色和电镜观察心肌组织病理组织和超微结构改变,酶联免疫法检测犬血清TGF-β1和CTGF,然后采用免疫组化法,RT-PCR和Western blot检测Jumonji基因和蛋白变化。结果:1.心衰模型制作手术成功并顺利完成实验。模型组12只犬经持续快过30天快速持续右心室起搏后比格犬出现不同程度的食欲降低、活动量减少、呼吸频率加快等心衰症状,心衰标准平均动脉压(mean artery pressure,MAP)60 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),射血分数50%,心肌超微结构显示:肌溶解,线粒体变长。闰盘扭模糊和不连续。2.经胸腔心包腔注射AAV9-Jumonji-EGFP基因转染后,左右心室冰冻切片均显示大量绿色荧光蛋白表达,呈强阳性。免疫组化检测犬左右心室心肌Jumonji表达显示:可见大量棕色颗粒表达。犬左右心室Jumonji和蛋白表达显示可见犬左右心室Jumonji与β-actin基因和蛋白比较表达增强。结论:1.快速持续起搏右心室30天时,心衰+AAV9-Jumonji-EGFP组犬成功制作心衰模型,血清中MAP和LVEF均明显降低,转染Jumonji基因14天后,MAP和LVEF均恢复到正常水平,提示Jumonji基因可明显改善心衰。2.快速持续起搏心室致心衰犬血清TGF-β1和CTGF比基础水平明显升高,研究结果与上述国外临床及基础研究结果一致。而给予AAV9-Jumonji后,TGF-β1和CTGF水平明显下降,结合MAP和LVEF值下降,结果显示,Jumonji基因通过抑制TGF-β1和CTGF水平增加来逆转心肌纤维化,改善心衰症状。
【关键词】：心衰 Jumonji基因 TGF-β1 CTGF
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R541.6
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 前言12-14
• 内容与方法14-20
• 1.实验材料14-15
• 1.1 研究对象14
• 1.2 实验动物分组14
• 1.3 实验器械和仪器14-15
• 1.4 实验药品和试剂15
• 2.实验方法15-19
• 2.1 持续快速右心室起搏犬致心衰模型制作15-16
• 2.2 超声心动图检查心脏形态和功能16
• 2.3 标本采集和病理形态学观察16
• 2.4 经胸心包腔注射AAV9-Jumonji-EGFP基因转染16-17
• 2.5 AAV9-Jumonji-EGF表达检测17
• 2.6 酶联免疫法检测犬血清TGF-β1 和CTGF17-18
• 2.7 RT-PCR 和 Western blot 检测 Jumonji 在犬各组织中的表达18-19
• 3 统计方法19
• 4 质量控制19-20
• 结果20-27
• 讨论27-31
• 小结31-32
• 致谢32-33
• 参考文献33-36
• 综述36-44
• 参考文献41-44
• 攻读硕士学位期间发表的学位论文44-45
• 导师评阅表45

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1 张莹,张郁,孙叶方,史俊南;TGF-β对人牙乳头间充质细胞碱性磷酸酶的影响[J];牙体牙髓牙周病学杂志;1999年04期

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4 邹贵勉,张t，

本文编号：725537