沉默ESRP1基因表达对卵巢癌OVCAR5细胞中FGFR2亚型转化的影响

发布时间：2017-08-24 07:09

  本文关键词：沉默ESRP1基因表达对卵巢癌OVCAR5细胞中FGFR2亚型转化的影响

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【摘要】：目的 :研究沉默上皮剪接调节蛋白(1epithelial splicing regulatory protein 1,ESRP1)基因表达对卵巢癌OVCAR5细胞中成纤维细胞生长因子受体2(fibroblast growth factor receptor 2,FGFR2)亚型转换的影响。方法:构建靶向ESRP1基因的ESRP1-sh RNA慢病毒表达载体(p LVTHM/ESRP1-sh RNA1和p LVTHM/ESRP1-sh RNA2),同时设置阴性对照(negative control,NC)质粒(p LVTHM/NC-sh RNA);将3种质粒分别转染到293T细胞中制备慢病毒。慢病毒感染卵巢癌OVCAR5细胞后,分别采用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测ESRP1 m RNA及蛋白的表达水平;采用限制性内切酶AvaⅠ和Hin CⅡ检测沉默ESRP1基因后对FGFR2亚型转换的影响;MTT法检测沉默ESRP1基因后对OVCAR5细胞增殖的影响;蛋白质印迹法检测上皮标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、间质标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)及β-链蛋白(β-catenin)表达的变化。结果:成功构建靶向ESRP1基因的sh RNA慢病毒表达载体并包装获得慢病毒;与阴性对照组比较,靶向ESRP1基因的sh RNA能明显抑制OVCAR5细胞中ESRP1 m RNA及蛋白的表达(P值均0.05);沉默ESRP1基因的表达能诱导OVCAR5细胞中FGFR2由上皮亚型(FGFR2b)向间质亚型(FGFR2c)的转换,并促进OVCAR5细胞的增殖(P0.05);同时,下调E-cadherin的表达水平而上调N-cadherin的表达水平,并激活β-catenin(P值均0.05)。结论:沉默ESRP1基因表达能诱导OVCAR5细胞中FGFR2亚型的转换,促进OVCAR5细胞增殖,并诱导OVCAR5细胞发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),该过程可能涉及Wnt/β-catenin信号通路。
【作者单位】： 三峡大学医学院生物化学教研室;
【关键词】： 卵巢肿瘤 上皮剪接调节蛋白 受体 成纤维细胞生长因子 型 上皮-间质转化
【基金】：国家自然科学基金资助项目(编号:81550029) 三峡大学人才启动基金(编号:KJ2014B064) 湖北省自然科学基金(编号:2015CFB198) 肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室(三峡大学)开放基金课题(编号:2015KZL02) 宜昌市科学技术局项目(编号:A16-301-31)~~
【分类号】：R737.31
【正文快照】： 结论:沉默ESRP1基因表达能诱导OVCAR5细胞中FGFR2亚型的转换,促进OVCAR5细胞增殖,并诱导OVCAR5细胞发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),该过程可能涉及Wnt/β-catenin信号通路。4.肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室(三峡大学)开放基金课题(编号:20

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本文编号：729885