利用CR-RT-PCR技术克隆大葱线粒体cob基因

发布时间：2017-08-24 18:00

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【摘要】：本研究以大葱花蕾为材料,对环化RNA反转录聚合酶链式反应(CR-RT-PCR)技术在RNA反应时间和试剂添加上进行了优化,并用优化后的技术对大葱线粒体cob基因的全长进行了扩增。在本实验条件下,最优环化反应条件为:RNA首先65℃反应5 min,加入反应试剂后15℃反应2 h,最后70℃反应10 min使酶失活,反应体系中不必添加催化剂PEG6000。实验结果表明,cob基因全长为1 522 bp,无poly(A)尾,包含完整的N端和C端,共编码397个氨基酸。系统进化树分析显示大葱cob基因与同属的洋葱同源性最高,且与其他单子叶植物聚为一类。研究表明此技术获得的线粒体cob基因信息完整,可进行后续功能研究。
【作者单位】： 沈阳农业大学园艺学院;北京市农林科学院蔬菜研究中心;农业部华北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室;蔬菜种质改良北京市重点实验室;
【关键词】： 葱 线粒体 CR-RT-PCR
【基金】：国家自然科学基金(31372066) 北京市农林科学院科技创新能力建设专项(KJCX20140111)共同资助
【分类号】：S633.1;Q943.2
【正文快照】： *通讯作者,wangyongqin@nercv.org;z.r.zh@163.netCloning Allium fistulisum Mitochondria cob Gene by CR-RT-PCRTechnologyZhang Dandan1,2,3,4Liu Qianchun2,3,4Zhao Hong2,3,4Wen Changlong2,3,4Wang Yongqin2,3,4*Zhao Rui1*1 College of Horticulture,Shenyang Agricul，

本文编号：732707