小鼠白细胞介素IL-35基因慢病毒表达载体的构建及鉴定

发布时间：2017-08-28 11:29

  本文关键词：小鼠白细胞介素IL-35基因慢病毒表达载体的构建及鉴定

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【摘要】：[目的]构建小鼠白细胞介素IL-35基因慢病毒表达载体并鉴定。[方法]通过PCR法扩增出小鼠IL-35基因片段,将其与经XhoⅠ和XbaⅠ双酶切的慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1连接,构建慢病毒重组质粒pLVX-IL-35-IRES-ZsGreen1。用无内毒素试剂盒提取重组质粒后,将其与病毒包装所需的3个辅助质粒共转染到人肾胚(HEK)293T细胞中包装能表达IL-35的慢病毒颗粒。该病毒培养上清经浓缩后,梯度稀释法检测其滴度。用浓缩后的病毒感染HEK293T细胞,然后通过荧光显微镜观察荧光蛋白的表达并结合RT-PCR法检测IL-35基因在该细胞中的表达。[结果]IL-35慢病毒表达载体构建成功,包装的慢病毒滴度为1×109TU/m L,通过荧光显微镜和RTPCR检测发现IL-35在HEK293T细胞中表达。[结论]成功构建IL-35慢病毒表达载体且IL-35蛋白能在HEK293T细胞中过表达。
【作者单位】： 宁波大学医学院免疫学研究室;
【关键词】： IL- 慢病毒 构建 共转染 鉴定
【分类号】：Q78
【正文快照】： 白细胞介素(interleukin,IL)-35是2007年命名的一种新型抗炎/免疫抑制细胞因子[1],是IL-12细胞因子家族的一员。它与IL-12家族其它成员IL-12、IL-23和IL-27一样,均为异源二聚体蛋白。EB病毒诱导基因(Epstein-Barr virus-in-duced gene,EBI)3和IL-12p35(IL-12A)两个亚基结合组

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2 刘圈;;L-35高铅玻管成型的影响因素及工艺调整对策[A];中国硅酸盐学会2003年学术年会论文摘要集[C];2003年

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本文编号：747850