苏云金芽胞杆菌cry1Ie新基因的克

发布时间：2017-08-28 17:19

  本文关键词：苏云金芽胞杆菌cry1Ie新基因的克隆、表达与生物活性测定

  更多相关文章： 苏云金芽胞杆菌 cryIe基因 鳞翅目害虫 克隆

【摘要】：为获得新的鳞翅目害虫杀虫基因,根据已知cry1I类基因编码区设计简并引物,采用直接克隆法,以苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)菌株BN23-5质粒DNA为模板进行扩增,并对得到的基因进行鉴定和分析。结果表明:克隆得到一个完整的cry1Ie基因,全长2 160 bp,由719个氨基酸组成,该氨基酸序列与已知的4种Cry1Ie蛋白不同,与Cry1Ie2和Cry1Ie3的氨基酸序列同源性最高,为95.4%,被国际Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会命名为Cry1Ie5(登录号为KJ710646)。将该基因插入表达载体p ET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG低温诱导成功表达,SDS-PAGE电泳验证其大小为81 k D,与预测的分子量相符合。生物活性测定表明,Cry1Ie5表达的包涵体蛋白对小菜蛾和亚洲玉米螟具有杀虫活性,LC_(50)分别为0.43μg/m L和48.39μg/m L;对棉铃虫的致死率不高,但能明显抑制其生长;对甜菜夜蛾没有杀虫活性。
【作者单位】： 四川农业大学水稻研究所;四川农业大学西南作物基因资源与遗传改良教育部重点实验室;
【关键词】： 苏云金芽胞杆菌 cryIe基因 鳞翅目害虫 克隆
【基金】：国家重大转基因专项(2011ZX08009-003-001-009)
【分类号】：S476
【正文快照】： 苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)为革兰氏阳性细菌(Schnepf et al.,1998),主要分布在土壤、尘埃、淤泥、虫尸、污水等介质中。Bt可以在形成芽孢的同时产生晶体,晶体蛋白(insecticidal crys-tal proteins,ICPs)主要由cry和cyt基因编码,具有特异的杀虫活性,如农业害

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