杀粉蝶菌素A1生物合成基因簇中甲基转移酶PieB2的功能

发布时间：2017-08-29 02:34

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【摘要】：【目的】研究杀粉蝶菌素A1产生菌中甲基转移酶基因pieB2的功能。【方法】利用接合转移和同源重组双交换的方法,构建pieB2基因缺失突变株,以及利用接合转移的方法,构建回补菌株。通过高保真PCR克隆pieB2基因到表达载体pET28a上,构建质粒pJTU5997,转化入大肠杆菌E.coliBL21(DE3)/pLysE中诱导表达。利用高效液相色谱检测PieB2的体外酶活。【结果】获得了pieB2基因缺失的双交换突变株。发酵结果显示,该突变株不再产生杀粉蝶菌素A1,而是积累了一种脱甲基产物。N-末端融合组氨酸标签的PieB2在大肠杆菌中获得可溶性表达,通过体外催化证明了PieB2甲基转移酶的功能。【结论】体内遗传实验和体外生化实验证明了PieB2作为甲基转移酶在杀粉蝶菌素A1合成中的作用。
【作者单位】： 上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室;
【关键词】： 杀粉蝶菌素A 甲基转移酶 基因敲除 生物合成
【基金】：国家自然科学基金(31170085) 国家“973计划”(2012CB721004)~~
【分类号】：TQ453;Q78
【正文快照】： 杀粉蝶菌素A1(Piericidin A1,图1)是一种具2012年,上海交通大学联合加州大学洛杉矶分校有良好生物活性的α-吡啶酮类天然产物,可由多在此菌株中克隆了杀粉蝶菌素A1生物合成基因种链霉菌产生[1]。它通过结合线粒体呼吸作用复簇,初步解析了其核心结构α-吡啶酮的生物合成合体I,

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本文编号：750893