冷胁迫下紫花苜蓿越冬芽组织结构观察与抗寒基因的研究

发布时间：2017-08-29 07:36

  本文关键词：冷胁迫下紫花苜蓿越冬芽组织结构观察与抗寒基因的研究

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【摘要】：紫花苜蓿[Medicago sativa L.]作为理想的人工饲草草地栽培品种,可为青藏高原草地畜牧业的发展提供一条可持续发展的新途径。本文通过显微结构观测探索冷胁迫下青大1号紫花苜蓿新品系越冬芽组织结构变化情况;利用基因工程技术获得新品系抗寒基因的全长序列,并对该基因进行鉴定及分析。试验结果表明:随着胁迫时间逐渐延长新品系紫花苜蓿越冬芽组织结构越发紊乱,外表皮出现破裂现象,部分细胞壁结构出现明显变形;在温度达到零下20℃,处理时间24 h时,部分紫花苜蓿越冬芽组织细胞核及细胞器出现解离现象。提取青大1号紫花苜蓿[Medicago sativa L.cv.Qingda No.1]越冬芽总RNA,获得cDNA,根据Genebank中发布的CAS序列设计引物进行PCR扩增,进行原核表达,得到377 bp的片段,该紫花苜蓿CAS包含了一个361 bp的开放阅读框,与紫花苜蓿BudCAR6基因(AF220458.1)同源性为96%,与紫花苜蓿pMSACIB CAS15B(L12462.1)同源性为95%,与扁蓿豆CAS15B(KF208641.1)同源性为90%。推测编码了120个氨基酸。
【关键词】：紫花苜蓿 冷耐受性 抗寒基因 克隆 越冬芽组织结构图
【学位授予单位】：青海大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S541.9
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第一章 引言9-16
• 1.1 青藏高原草地畜牧业简介9-10
• 1.1.1 青藏高原草地畜牧业的现状研究9
• 1.1.2 青藏高原草地畜牧业发展存在的问题及思考9-10
• 1.2 紫花苜蓿及紫花苜蓿人工草地产业10-15
• 1.2.1 紫花苜蓿的基本介绍10-11
• 1.2.2 青藏高原紫花苜蓿人工草地产业的发展现状11
• 1.2.3 紫花苜蓿生物学特性11-12
• 1.2.4 抗寒基因概况12-15
• 1.3 本研究目的与意义15-16
• 第二章 低温胁迫下青大1号紫花苜蓿组织显微结构研究16-24
• 2.1 前言16
• 2.2 试验材料16-17
• 2.2.1 试验材料16
• 2.2.2 试验材料准备及预处理16-17
• 2.3 主要试验设备与试剂17
• 2.3.1 主要试验试剂17
• 2.3.2 主要试验仪器设备17
• 2.4 试验方法17-19
• 2.4.1 石蜡永久切片的制作17-19
• 2.4.2 显微镜检测19
• 2.4.3 试验数据整理分析19
• 2.5 试验结果19-22
• 2.5.1 低温胁迫条件下青大1号紫花苜蓿越冬芽显微图分析19-20
• 2.5.2 低温胁迫条件下青大1号紫花苜蓿越冬芽显微图数据分析20-22
• 2.6 讨论22-23
• 2.7 小结23-24
• 第三章 青大1号紫花苜蓿CAS克隆表达及鉴定24-37
• 3.1 前言24
• 3.2 试验材料24-25
• 3.2.1 样品采集地点概况24
• 3.2.2 试验样品采集24
• 3.2.3 试验样品预处理24-25
• 3.3 主要试验设备与试剂25
• 3.3.1 试验主要试剂25
• 3.3.2 试验主要仪器设备25
• 3.4 试验方法25-31
• 3.4.1 引物设计合成25-26
• 3.4.2 总RNA的提取和cDNA链的合成26
• 3.4.3 RNA的检测26-27
• 3.4.4 单链cDNA的合成27-28
• 3.4.5 PCR扩增28-29
• 3.4.6 产物的回收29
• 3.4.7 紫花苜蓿扩增目的基因片段与载体的连接29-30
• 3.4.8 目的基因的转化30
• 3.4.9 目的基因片段质粒DNA的提取、表达及测序30
• 3.4.10 青大1号紫花苜蓿抗寒基因的鉴定及生物信息学分析30-31
• 3.5 结果31-35
• 3.5.1 总RNA提取结果31
• 3.5.2 RT-PCR结果分析31-32
• 3.5.3 产物回收结果32
• 3.5.4 紫花苜蓿扩增目的基因片段与载体的连接、目的基因转化32
• 3.5.5 青大1号紫花苜蓿抗寒基因的鉴定及生物信息学分析32-35
• 3.6 讨论35
• 3.7 小结35-37
• 第四章 结论37-38
• 4.1 低温胁迫下青大1号紫花苜蓿组织显微结构研究结论37
• 4.2 青大1号紫花苜蓿抗寒基因相关研究结论37-38
• 参考文献38-43
• 致谢43-44
• 作者简介44-45

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本文编号：752103