内含肽介导的天蚕素AD基因工程表达、其酰胺化及应用

发布时间：2017-08-31 08:10

  本文关键词：内含肽介导的天蚕素AD基因工程表达、其酰胺化及应用

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【摘要】：目的设计、合成天蚕素AD(CAD)基因序列,与内含肽(Intein)融合表达后通过重组蛋白自剪切作用获得C端酰胺化的CAD,并与抗生素配伍使用。方法根据大肠埃希菌密码子偏好性对CAD基因序列进行改造,人工合成目的基因,构建重组质粒pCold-SUMO-CAD-Intein,转化大肠埃希菌,诱导表达重组蛋白,经镍柱亲和层析纯化,后用DTT及肠激酶切割,利用分子筛纯化获得酰胺化CAD,并进行电泳及质谱鉴定。采用微量肉汤法检测重组CAD抑菌活性及其与不同抗生素按不同比例配伍使用的抑菌活性。结果 PCR扩增目的基因片段为132bp,与预期一致。质谱显示表达的CAD分子质量单位为3.949ku,与理论值相符。所得CAD抗菌肽对常见革兰阴性菌抗菌力强,配伍抗生素使用能发挥协同抑菌作用。结论成功构建CAD基因重组质粒pCold-SUMO-CAD-Intein,通过与内含肽(Intein)融合表达,经分子内的自剪切作用直接获得C末端酰胺化的抗菌肽,与抗生素配伍使用,能显著降低抗生素用量,具有作为抗生素替代物的应用潜力。
【作者单位】： 青岛康伦生物科技有限公司;
【关键词】： 天蚕素AD 表达 酰胺化 抗生素 配伍
【基金】：科技型中小企业技术创新基金项目(No.14C26213712180)
【分类号】：Q78;R91
【正文快照】： *?**?近年来传统抗生素滥用情况日趋严重,抗生素耐药菌株不断出现,亟待研发新的安全高效的抗菌药物。抗菌肽(antimicrobial peptides)是一种古老而广泛存在于生物界中的活性多肽,世界上首次被发现的***抗菌肽为天蚕素(Cecropins),其抗菌谱广,具有抗多重耐药菌及真菌的作用。部

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