犬细小病毒VP2基因克隆及原核表达分析

发布时间：2017-09-01 20:14

  本文关键词：犬细小病毒VP2基因克隆及原核表达分析

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【摘要】：试验旨在了解河北与甘肃地区犬细小病毒流行情况,并通过原核表达系统获得犬细小病毒VP2蛋白,制备该蛋白的多克隆抗体,为进一步研究犬细小病毒致病机理和治疗方法奠定基础。从10份疑似感染犬细小病毒犬的病料中提取病毒基因组DNA,并以其作为模板进行VP2基因的PCR扩增,将目的片段进行测序和分析后克隆至原核表达载体pET-30a中,阳性质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并诱导表达,诱导产物经SDSPAGE鉴定表达后切割目的蛋白条带免疫豚鼠制备多克隆抗体。序列分析结果显示成功克隆VP2基因,10株分离株中CPV-2a型占80%,CPV-2b型占20%。本试验检测的毒株与部分中国毒株形成了一个分支,与韩国、美国分离株呈现一定差异,与意大利分离株同源性较低。Western blotting分析证实了通过原核表达系统成功获得的大小为70ku左右的重组蛋白具有反应原性和免疫原性。该试验初步表明河北与甘肃地区以CPV-2a型为主,原核表达的VP2蛋白具有良好的抗原性,本试验结果为犬细小病毒的防控提供科学依据。
【作者单位】： 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病实验室;廊坊市动物疾病预防控制中心;
【关键词】： 犬细小病毒 VP 基因型 原核表达
【基金】：甘肃省重大专项(1203NKDA027)
【分类号】：S852.65
【正文快照】： 犬细小病毒病是由犬细小病毒(canine parvo-virus,CPV)感染引起的一种急性烈性传染病[1],临床上以急性出血性肠炎、呕吐为主要特征[2]。其感染不分年龄和品种,但断奶后的幼犬发病率较高,可引起非化脓性心肌炎。1978年CPV首次被发现[3],属于细小病毒科,细小病毒属,是无囊膜单股

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3 易立;程世鹏;;犬细小病毒分子生物学研究进展[J];特产研究;2008年01期

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