Clk1基因表达下调通过糖酵解逆转增强胶质瘤细胞对化疗药物的耐受性

发布时间：2017-09-02 13:24

  本文关键词：Clk1基因表达下调通过糖酵解逆转增强胶质瘤细胞对化疗药物的耐受性

  更多相关文章： Clk1 胶质瘤细胞 药物耐受 BCNU 糖酵解 AMPK/mTOR/HIF-1α信号通路

【摘要】：神经胶质瘤是最常见的神经系统原发性肿瘤,具有恶性度高、预后性差的特点。产生药物耐受性是胶质瘤患者临床治疗的主要障碍,而线粒体基因突变在许多恶性肿瘤的化疗药物耐受中发挥重要作用。线粒体基因Clk1编码辅酶Q(Co Q)生物合成关键酶,在本实验中,我们探讨了Clk1基因在胶质瘤细胞产生药物耐受过程中的作用。研究发现,Clk1基因高表达的GL261细胞对抗肿瘤药物具有较高的敏感性,而在BCNU耐受的胶质瘤细胞如U251、U87MG、T98G中Clk1基因的表达量较少。沉默Clk1基因不影响GL261细胞的增殖活力,却能显著减低BCNU或DDP诱导的细胞凋亡。此外,沉默Clk1基因的GL261细胞中细胞耐药性相关基因如MDR1、MGMT、GSTP1的表达量无明显变化。进一步的机制研究结果表明,Clk1基因沉默的GL261细胞有氧糖酵解活性显著增强,具体表现在葡萄糖消耗量增加、乳酸生成量增加、糖酵解相关酶表达量增加。采用抑制剂或si RNA干扰抑制糖酵解通路可以增强sh Clk1-GL261细胞对化疗药物的敏感性。另外,GL261细胞中沉默Clk1基因诱导AMPK/m TOR信号通路介导的HIF-1α表达量升高,激活AMPK(metaformine)或抑制m TOR(rapamycine)可以抑制HIF-1α表达。在GL261细胞或人源胶质瘤细胞中过表达Clk1基因可以增强细胞对BCNU的敏感性。上述结果证实了胶质瘤细胞中线粒体Clk1基因通过AMPK/m TOR/HIF-1α信号通路介导的糖酵解途径增强细胞对化疗药物的耐受性。
【关键词】：Clk1 胶质瘤细胞 药物耐受 BCNU 糖酵解 AMPK/mTOR/HIF-1α信号通路
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 前言9-11
• 实验材料和方法11-21
• 1 实验动物和细胞11
• 2 实验仪器11-12
• 3 实验试剂12-14
• 4 实验方法14-20
• 4.1 溶液配制14-15
• 4.2 细胞培养与细胞系构建15-16
• 4.3 总RNA提取和RT-PCR16-18
• 4.4 Western Blotting免疫印迹18-19
• 4.5 MTT检测19
• 4.6 细胞增殖实验19
• 4.7 体内肿瘤模型建立19
• 4.8 细胞代谢检测19-20
• 5 数据处理和统计学方法20-21
• 实验结果21-31
• 1 Clk1表达水平与胶质瘤细胞的化药敏感性相关21-22
• 2 沉默Clk1基因降低GL261细胞对抗肿瘤药物的敏感性22-24
• 3 Clk基因敲除导致细胞糖酵解水平升高24-27
• 4 HIF-1α介导Clk1缺失诱导的有氧糖酵解和药物耐受27-28
• 5 mTOR信号通路介导HIF-1α表达28-29
• 6 Clk1过表达增强了胶质瘤细胞对BCNU的敏感性29-30
• 7 Clk1在神经胶质瘤药物耐受性中的作用30-31
• 讨论31-34
• 小结34-35
• 参考文献35-43
• 综述43-55
• 参考文献51-55
• 攻读学位期间发表的论文55-56
• 附录：缩略词表56-58
• 致谢58-59

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本文编号：778810