羊种布鲁氏菌新疆流行株015株sodc基因缺失株的构建与初步评价

发布时间：2017-09-02 12:14

  本文关键词：羊种布鲁氏菌新疆流行株015株sodc基因缺失株的构建与初步评价

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【摘要】：为了构建布鲁氏菌015 sodc基因缺失株,本研究采用PCR方法以热灭活的羊种布鲁氏菌新疆流行株015为模板,分别扩增sodc基因的上下游同源臂序列;以枯草芽孢杆菌为模板,扩增Sac B基因,将扩增序列分别连至克隆载体p MD19-T simple上并测序,然后在双酶切后将上下游同源臂序列连接至自杀载体p GEM-7Zf+上,分别得到了p GEM-7zf-Δsodc,再将Sac B基因单酶切后连接至上述载体上,构建成同源重组自杀质粒pss。经8%蔗糖平板筛选鉴定Sac B基因的活性。将构建好的自杀质粒分别电转化至布鲁氏菌015感受态细胞中,通过氨苄抗性筛选和8%蔗糖敏感筛选后获得了015Δsodc基因缺失株。对获得的基因缺失株进行PCR鉴定和遗传稳定性检测。通过检测侵染小鼠巨噬细胞cfu、缺失株免疫小鼠后体内Ig G,IFN-γ的水平,及脾脏cfu,对其毒力进行了初步评价。结果表明,该缺失株20代内未发生回复性突变,成功构建了具有非抗性基因标记的缺失株,并且015Δsodc细胞cfu、脾脏cfu,及IFN-γ的水平都显著低与亲本株015,说明毒力与亲本株相比有一定程度的下降。本研究可为今后布鲁氏菌致病机理及新疫苗的研究提供实验材料。
【作者单位】： 石河子大学动物科技学院/新疆地方与民族高发病教育部重点实验室;铜仁学院生物与农林工程学院;石河子大学医学院病原生物学与免疫学教研室;
【关键词】： 布鲁氏菌 sodc基因 缺失株
【基金】：国际科技合作项目(2013DFA32380) 国家大学生SRP项目(201510759063)
【分类号】：S852.61
【正文快照】： 布鲁氏菌病是由布鲁氏菌属(Brucella)成员引起的一种慢性人畜共患传染病[1-2]。人感染后表现为持续发热、多汗及肝脾肿大,家畜感染后可造成流产、空怀等[3]。目前,此病已使全世界遭受了巨大的经济损失。近年来,随着畜牧业的发展,我国和世界部分地区布鲁氏菌病的人畜疫情均出现，

本文编号：778476