鸡源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR检测及传播机制的初步研究
发布时间:2017-09-02 16:02
本文关键词:鸡源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR检测及传播机制的初步研究
更多相关文章: 鸡源大肠杆菌 耐药性 质粒介导的氟苯尼考耐药基因 MIC 传播机制
【摘要】:随着兽医临床菌株耐药性逐年上升,多重耐药及泛耐药现象越来越严重。但是新兽药的研发进展较缓慢,价格昂贵,对早期特别是不容易引起耐药性的药物的重新应用可作为控制多重耐药菌株导致的疾病的首要选择。本论文初步研究了鸡源大肠杆菌中质粒介导氟苯尼考耐药基因floR的流行状况和传播机制,为减少氟苯尼考耐药菌株的出现和减缓耐药的程度提供依据,为解决兽医临床耐药性传播问题提供新思路。本研究对2013~2014年分离自常州地区的80株鸡源大肠杆菌,首先,采用PCR方法检测质粒介导氟苯尼考耐药基因floR,并以微量肉汤稀释法测定80株大肠杆菌对阿莫西林、氟苯尼考、黏菌素、链霉素、恩诺沙星、多西环素、头孢喹肟、安普霉素的体外最小抑菌浓度。其次,采用大肠杆菌系统进化分群对80株大肠杆菌的亲缘关系进行判定。第三,对78株floR阳性菌株进行接合实验,对得到的疑似接合子通过最小抑菌浓度和PCR两种方法进行鉴定,并分析供体菌、受体菌、接合子三者的最小抑菌浓度以及接合子中floR耐药基因的转移情况。第四,取接合实验成功的菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)并通过Southern杂交等方法研究floR的传播方式以及floR耐药基因的定位。研究结果如下:80株禽源大肠杆菌floR基因检出率为97.50%(78/80)。floR基因在禽源大肠杆菌中具有相当高的流行率。细菌对各药物的耐药率分别为:阿莫西林96.25%(77/80)、氟苯尼考90.00%(72/80)、黏菌素80.00%(64/80)、链霉素75.00%(60/80)、恩诺沙星72.50%(58/80)、多西环素56.25%(45/80)、安普霉素18.75%(15/80)。说明本研究中禽源大肠杆菌对氟苯尼考等大多药物都有显示严重的耐药情况。通过大肠杆菌种族系统进化分析,80株禽源大肠杆菌中,非致病性菌株(A)为35.00%(28/80)、低致病性菌株(B1)35.00%(28/80)、高致病性菌株(B2)2.50%(2/80)和高致病性菌株(D)27.50%(22/80)。78株floR阳性菌株接合实验结果表明,接合实验的接合率为62.83%(49/78),floR接合子对氟苯尼考的MIC值比受体菌升高了16-32倍,而比供体菌MIC降低了2-8倍。同时发现接合子对阿莫西林、黏菌素、链霉素、恩诺沙星、多西环素、安普霉素的MIC值也发生了相应的变化,由此得出氟苯尼考和其它常见药物的耐药性存在共传递效应。且49株接合子中均含有floR耐药基因。挑取的TM10、TM12和WJ13菌株检测进行脉冲场凝胶电泳(S1-PFGE)并通过Southern杂交,显示耐药基因floR的质粒为大质粒,约为130-210kb左右。
【关键词】:鸡源大肠杆菌 耐药性 质粒介导的氟苯尼考耐药基因 MIC 传播机制
【学位授予单位】:扬州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:S852.61
【目录】:
- 中文摘要3-4
- ABSTRACT4-8
- 符号说明8-10
- 第一章 文献综述10-20
- 1 禽源大肠杆菌的耐药现状10-11
- 2 氟苯尼考药物的研究进展11-13
- 2.1 氟苯尼考化学结构和属性11-12
- 2.2 氟苯尼考药物的作用机制12
- 2.3 氟苯尼考药物的应用发展12-13
- 3 细菌对氟苯尼考的耐药机制13-16
- 3.1 酶的灭活作用13
- 3.2 外排泵13-15
- 3.3 作用靶位的改变15-16
- 3.4 其他的耐药机制16
- 4 氟苯尼考耐药基因的传播机制16-19
- 5 本研究的目的意义19-20
- 第二章 质粒介导的氟苯尼考耐药基因检测及体外抑菌试验20-35
- 1 材料20-21
- 1.1 仪器与设备20-21
- 1.2 主要试剂21
- 1.3 试验菌株21
- 1.4 试验药物21
- 2 试验方法21-27
- 2.1 细菌的分离和鉴定21-22
- 2.2 floR耐药基因的检测22-23
- 2.3 抗菌药物对大肠杆菌MIC的测定23-25
- 2.4 大肠杆菌种族系统进化分析25-27
- 3 结果与分析27-33
- 3.1 floR基因检测结果27-28
- 3.2 体外抑菌试验结果28-31
- 3.3 大肠杆菌种族系统进化分析结果31
- 3.4 不同系统进化分群大肠杆菌菌株耐药结果31-33
- 4 讨论33-34
- 5 小结34-35
- 第三章 大肠杆菌质粒介导氟苯尼考耐药基因floR传播机制35-45
- 1 材料35-36
- 1.1 仪器与设备35
- 1.2 主要试剂35-36
- 1.3 试验菌株36
- 2 试验方法36-40
- 2.1 接合实验36
- 2.2. 疑似接合子的鉴定36
- 2.3 floR阳性菌株PFGE分型36-39
- 2.4 floR阳性菌株的定位39-40
- 3 结果与分析40-43
- 3.1 阳性菌的接合试验结果40
- 3.2 floR阳性接合子的耐药基因扩增及药物敏感性结果40-41
- 3.3 接合子及原菌株的MIC比较41-43
- 3.4 floR阳性菌定位结果43
- 4 讨论43-44
- 5 小结44-45
- 全文结论45-46
- 参考文献46-53
- 致谢53-54
- 在读期间发表的文章54-55
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 严世方,包幼迪;庆大霉素耐药基因的分子克隆[J];中国抗生素杂志;1990年05期
2 严世方;包幼迪;;庆大霉素耐药基因蔓延规律的研究进展[J];国外医学(流行病学传染病学分册);1989年05期
3 路浩;王兴龙;李晓艳;雷连成;鲁景艳;冯新;万家余;李忠义;杨冬;;基因芯片检测细菌耐药基因[J];中国兽医学报;2008年02期
4 明德松;苏智军;张志珊;谢尊金;;全耐药菌10种耐药基因的研究[J];中华医院感染学杂志;2013年09期
5 李洪敏,吴雪琼,梁建琴,肖漓,张树新,韩慧新;结核分枝杆菌临床株4种耐药基因的检测与分析[J];微生物学通报;2002年02期
6 郭玲娇;狄云香;李秀丽;;耐万古霉素屎肠球菌耐药基因的研究[J];中华医院感染学杂志;2011年09期
7 黄支密;单浩;郭满盈;陈榆;仵蕾;糜祖煌;诸葛青云;秦玲;;多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因及亲缘性分析[J];中华医院感染学杂志;2007年04期
8 孙各琴;张炽伦;王前;张秀明;兰海丽;郑磊;卢兰芬;吴秀娟;;淋菌耐药表型与耐药基因的分析[J];中华医院感染学杂志;2011年02期
9 梁思思;李s,
本文编号:779481
本文链接:https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/779481.html
最近更新
教材专著