橘小实蝇nAChR α9亚基基因的鉴定及其时空表达

发布时间：2017-09-02 19:05

  本文关键词：橘小实蝇nAChR α9亚基基因的鉴定及其时空表达

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【摘要】：【目的】橘小实蝇Bactrocera dorsalis是世界性分布的危害果蔬的重要检疫性农业害虫,目前已对包括新烟碱类在内的多种杀虫剂产生了抗性。本研究在克隆鉴定橘小实蝇烟碱型乙酰胆碱受体(n AChR)α9亚基基因c DNA的基础上,对其分子特性和系统发育进行生物信息学分析,并检测了该基因在橘小实蝇不同发育阶段及成虫不同组织中的表达模式,为进一步研究其潜在功能及在抗药性中的作用奠定基础。【方法】通过高通量测序技术对橘小实蝇进行转录组测序,对高质量序列拼接组装、基因鉴定及同源性比对分析,预测橘小实蝇烟碱型乙酰胆碱受体候选基因。采用RTPCR和RACE(rapid-amplification of c DNA ends)技术克隆该基因的c DNA全长序列,利用生物信息学分析软件分析其基本生物信息;以α-tubulin为内参基因,利用q PCR研究该基因mRNA在橘小实蝇不同发育阶段及成虫头、胸、腹等组织中的表达模式。【结果】根据预测的基因序列,设计特异性引物进行RACE扩增,从橘小实蝇中克隆获得一条烟碱型乙酰胆碱受体基因的全长序列,c DNA全长1 486 bp,完整开放阅读框1 281 bp,编码426个氨基酸,推测其蛋白质分子量为49.1 k D,理论等电点6.56。该基因经序列比对命名为Bdα9,Gen Bank登录号为JQ178254。氨基酸同源性及系统进化树分析显示,该基因的编码蛋白具有n AChRα亚基的典型特征,并与Agα9和Dmβ3聚类在一起,与其他昆虫n AChRα9亚基具有22%~27%的氨基酸序列一致性。q PCR结果表明,Bdα9mRNA在橘小实蝇整个发育阶段均有表达,成虫期的表达量显著高于卵、2龄幼虫、3龄幼虫和蛹期;Bdα9在橘小实蝇成虫头部中表达量最高,且显著高于胸部和腹部中的表达量。【结论】鉴定了橘小实蝇烟碱型乙酰胆碱受体基因Bdα9,明确了该基因在橘小实蝇不同发育阶段及成虫不同组织中的表达模式。根据q PCR的结果,推测Bdα9可能在橘小实蝇成虫期具有重要功能。
【作者单位】： 西南大学植物保护学院昆虫学及害虫控制工程重庆市市级重点实验室;贵阳学院生物与环境工程学院;
【关键词】： 橘小实蝇 烟碱型乙酰胆碱受体 基因克隆 序列分析 表达谱 实时定量PCR
【基金】：中国博士后基金(2013M540693) 重庆市前沿与基础研究项目(cstc2013jcyj A80020) 重庆市博士后特别资助项目(Xm2014114) 公益性行业(农业)科研专项(201203038)
【分类号】：S433
【正文快照】： 橘小实蝇Bactrocera dorsalis是一种世界性分布的危害果蔬的实蝇科(Tephritidae)重要农业害虫,已被多个国家列为检疫对象。橘小实蝇可危害46科250多种水果和蔬菜。成虫可刺穿果皮产卵,卵在果肉中孵化主要通过幼虫取食为害,大大降低了果品的市场价值,给农业生产带来巨大的经济

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