CYP4F2和β-actin基因实时荧光定量PCR标准品质粒和标准曲线的构建

发布时间：2017-09-02 22:01

  本文关键词：CYP4F2和β-actin基因实时荧光定量PCR标准品质粒和标准曲线的构建

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【摘要】：目的制备用于CYP4F2和β-actin基因mRNA实时荧光定量PCR检测的标准品质粒与标准曲线。方法通过PCR扩增CYP4F2和β-actin进行双酶切鉴定和测序分析,确保重组质粒完整正确;大量抽提重组质粒,测定其拷贝浓度,10倍稀释成梯度标准品,目的片断纯化后直接连接于p GEM-T easy载体,转化E.coli DH5α宿主菌,获得阳性克隆;通过PCR扩增进行荧光定量PCR检测分析。结果 CYP4F2和β-actin基因目的片段均成功重组,获得的重组质粒保持了目的片段的特异性和序列完整性。梯度浓度标准质粒的实时荧光定量PCR结果显示,循环阈值(Ct)与起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系。结论成功构建了CYP4F2和β-actin基因实时荧光定量PCR标准品质粒和标准曲线。
【作者单位】： 广州军区广州总医院药剂科广州市老年慢病患者合理用药重点实验室;华南理工大学生物科学与工程学院;
【关键词】： CYPF基因 β-actin基因 实时荧光定量PCR 重组质粒 标准品
【基金】：广州市科技计划项目(201509010012)
【分类号】：R440
【正文快照】： CYP4F2是人类细胞色素P450基因超家族成员之一,主要表达于肝脏和肾脏,是代谢花生四烯酸(AA)产生20-羟二十碳四烯酸(20-HETE)最主要的代谢酶[1-2]。肾脏中20-HETE具有多种血管活性,能调节肾脏的水钠平衡,从而影响全身血压[3-4]。β-actin是横纹肌肌纤维中的一种主要蛋白质成分,

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本文编号：781098