NRP1调控的MLL5和HOXA基因在NSCLC辐射抗性中的作用研究

发布时间：2017-09-05 05:29

  本文关键词：NRP1调控的MLL5和HOXA基因在NSCLC辐射抗性中的作用研究

  更多相关文章： NRP1 MLL5 HOXA6 HOXA9 肺癌 辐射抗性

【摘要】：随着经济与科技的不断发展,环境污染、生态破坏等问题却日趋严重,在各种化学因素、物理因素以及生物因素的影响下,恶性肿瘤的发病率逐年升高。其中,肺癌是所有恶性肿瘤中,发病率和死亡率增长速度最快、对健康威胁最大的恶性肿瘤之一。肺癌已经成为造成我国城市人口死亡的首位恶性肿瘤。其中,非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)约占所有肺癌的80%,约3/4的患者在疾病发现时已处于中晚期,五年生存率非常低。肺癌的治疗主要包括手术、化疗以及放疗。大部分的NSCLC患者在诊断时已经失去了手术机会,主要采取以放疗为主的综合治疗或单纯放疗,但5年生存率仅为15%左右。肿瘤细胞对电离辐射的抗性,是其无法被放疗治愈的原因之一。研究表明,神经纤毛蛋白1(neuropilin 1,NRP1)与肿瘤的恶性度相关,增强肿瘤的辐射抗性。我们通过全基因表达谱芯片发现,辐射抗性肺癌细胞中NRP1调控下游基因的表达,从而影响其辐射敏感性,如HOXAs和MLLs基因等。本研究在体外构建稳定细胞系,采用基因表达谱芯片、q RT-PCR法、Westernblot法、MTT法和流式细胞术等实验方法,探讨NRP1与其下游的HOXAs、MLL5的调控关系以及对肺癌细胞的放射敏感性的影响,同时从整体水平探讨NRP1与HOXA6、HOXA9和MLL5之间调控关系,并阐明其在NSCLC辐射抗性中的生物学意义。首先,通过microarray技术筛选出NRP1调控肺癌细胞辐射抗性的下游基因-HOXA6、HOXA9和MLL5,然后建立过表达和干扰NRP1的A549细胞模型,阐明NRP1对HOXA6、HOXA9和MLL5均具有正调控关系。其次,通过瞬时干扰HOXA6、HOXA9和MLL5表达的细胞模型,从细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期等方面,检测HOXAs和MLL5对A549细胞的辐射敏感性的影响。结果显示,干扰HOXA9和MLL5后能够抑制细胞增殖活性,且能抑制辐射诱导的细胞凋亡,可能与HOXA9干扰后能够抑制辐射后S期细胞比例明显减少的现象有关。最后,利用临床肺癌患者的组织标本和荷瘤裸鼠模型,验证NRP1与HOXA6、HOXA9和MLL5之间的确存在调控关系。本研究利用不同肺癌细胞系、临床肺癌组织样本和荷瘤动物模型,证实NRP1通过调控HOXAs和MLL5基因影响肺癌的辐射抗性,并揭示MLL5在这一通路上的作用。旨在为临床肺癌的放射治疗提供新的实验依据和理论基础。
【关键词】：NRP1 MLL5 HOXA6 HOXA9 肺癌 辐射抗性
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 内容提要4-5
• 中文摘要5-9
• Abstract9-20
• 第1章 文献综述20-30
• 1.1 肿瘤与辐射抗性20
• 1.2 NRP120-22
• 1.2.1. NRP1的生物学特点20-21
• 1.2.2 NRP1与肿瘤21
• 1.2.3 NRP1与辐射抗性21-22
• 1.3 HOX基因22-25
• 1.3.1 HOX的生物学特点与功能22-23
• 1.3.2 HOXs基因与MLL基因23-24
• 1.3.3 HOXs基因与组蛋白修饰24-25
• 1.3.4 mi RNAs、Lnc RNAs与HOXs基因25
• 1.4 HOXS基因与肿瘤25-28
• 1.4.1 HOXs基因与乳腺癌26
• 1.4.2 HOXs基因与肺癌26-27
• 1.4.3 HOXs基因与前列腺癌27
• 1.4.4 HOXs基因与结直肠癌27-28
• 1.4.5 HOXs基因与其他肿瘤28
• 1.5 HOXS基因与电离辐射28
• 1.6 立题依据28-30
• 第2章 材料与方法30-48
• 2.1 主要器材与仪器30-31
• 2.1.1 实验器材30
• 2.1.2 实验仪器30-31
• 2.2 主要试剂31-33
• 2.3 试剂的配制33-36
• 2.3.1 细胞培养相关试剂的配制33-34
• 2.3.2 细菌培养相关试剂的配制34
• 2.3.3 Western blot实验相关试剂的配制34-35
• 2.3.4 碱裂解法质粒提取相关试剂的配制35-36
• 2.3.5 感受态制备相关试剂的配制36
• 2.3.6 磷酸钙转染法相关试剂的配制36
• 2.4 细胞培养36-39
• 2.4.1 细胞株36
• 2.4.2 稳定表达细胞模型的建立36-39
• 2.4.3 瞬时转染细胞模型的建立39
• 2.4.4 辐射抗性细胞模型的建立39
• 2.5 临床肺癌患者组织标本39
• 2.6 实验动物39-40
• 2.7 照射条件40
• 2.7.1 细胞照射40
• 2.7.2 动物照射40
• 2.8 转录水平检测40-42
• 2.9 蛋白表达水平检测42-44
• 2.10 细胞放射敏感性及细胞表型指标的检测44-45
• 2.10.1 MTT实验44
• 2.10.2 细胞周期检测44-45
• 2.10.3 细胞凋亡率检测：Annexin V／PI双染法45
• 2.11 免疫组化45-47
• 2.11.1 DAB二步法45-46
• 2.11.2 免疫荧光染色46-47
• 2.12 统计学分析47-48
• 第3章 实验结果48-64
• 3.1 NRP1在肺癌细胞辐射抗性中的作用48-49
• 3.1.1 辐射抗性细胞模型A549-RR的建立及鉴定48
• 3.1.2 A549-RR细胞中NRP1的m RNA和蛋白水平变化48-49
• 3.1.3 A549-NRP1low模型的建立及鉴定49
• 3.2 筛选肺癌细胞辐射抗性中受NRP1调控的下游关键基因49-50
• 3.2.1 用基因芯片筛选NRP1调控辐射抗性的下游基因- MLL5、HOXA6、HOXA949-50
• 3.2.2 基因表达谱芯片结果中NRP1调控辐射抗性的下游基因的验证50
• 3.3 探讨NRP1与下游关键基因之间的调控关系50-52
• 3.3.1 NRP1对MLL5、HOXA6、HOXA9的调控规律50-51
• 3.3.2 MLL5、HOXA6和HOXA9基因干扰模型的建立51-52
• 3.3.3 MLL5、HOXA6、HOXA9对NRP1的影响52
• 3.4 电离辐射对NRP1、MLL5、HOXA6、HOXA9表达的影响52-54
• 3.4.1 电离辐射对不同NRP1水平细胞的MLL5、HOXA6、HOXA9影响52-53
• 3.4.2 电离辐射后NRP1、MLL5、HOXA6、HOXA9表达水平变化53-54
• 3.4.3 辐射抗性产生过程中NRP1、MLL5、HOXA6和HOXA基因表达量的变化54
• 3.5 NRP1及其调控的下游基因对A549细胞辐射效应的影响54-56
• 3.5.1 电离辐射对si RNA干扰模型细胞增殖活性的影响54-55
• 3.5.2 电离辐射对各种基因si RNA干扰模型细胞凋亡率的影响55-56
• 3.5.3 电离辐射对各种基因si RNA干扰模型细胞周期进程的影响56
• 3.6 整体水平验证NRP1与MLL5、HOXA6、HOXA9在临床NSCLC中的相关性56-61
• 3.6.1 NRP1及下游关键基因表达水平与NSCLC临床病理分型的相关性56-59
• 3.6.2 NSCLC组织标本中NRP1与MLL5-HOXA6、HOXA9相关性59-61
• 3.6.3 NSCLC组织标本中血管生成相关因子的表达水平61
• 3.7 荷瘤裸鼠模型中辐射对NRP1-MLL5-HOXA6/HOXA9通路的影响61-64
• 3.7.1 裸鼠荷瘤模型的建立61-62
• 3.7.2 移植瘤中辐射对NRP1-MLL5-HOXA6/HOXA9通路的影响62-63
• 3.7.3 移植瘤中辐射对血管生成相关因子表达水平的影响63-64
• 第4章 讨论64-69
• 4.1 筛选肺癌细胞辐射抗性中受NRP1调控的下游关键基因64-65
• 4.2 电离辐射对NRP1和下游关键基因的调控关系65-66
• 4.3 NRP1及其调控的下游基因对A549细胞辐射效应的影响66-67
• 4.4 整体水平验证NRP1-MLL5-HOXA6/HOXA9与NSCLC的关系67-68
• 4.5 荷瘤裸鼠模型中辐射对NRP1-MLL5-HOXA6/HOXA9通路的影响68-69
• 第5章 结论69-70
• 参考文献70-76
• 作者简介76-78
• 致谢78

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 陈剑,刘芬菊;抗辐射球菌辐射抗性机制的研究[J];国外医学(放射医学核医学分册);2003年05期

2 文润玲,李国莉;口服枸杞子对人体淋巴细胞辐射抗性的研究[J];辽宁中医杂志;2001年01期

3 王明锁,杜泽吉,杨占山,汪涛;耐辐射菌的辐射抗性与其核内DNA结合蛋白相关性研究[J];中国辐射卫生;2000年03期

4 文小倩,刘芬菊;脑胶质瘤辐射抗性与逆转问题研究进展[J];辐射研究与辐射工艺学报;2005年01期

5 江国春,袁丽珍,魏康,郭学敏,张雪峰;HT1080R细胞的辐射抗性与细胞周期关系初步研究[J];中华放射医学与防护杂志;2000年02期

6 张雪峰;细胞辐射抗性相关基因的研究进展[J];国外医学(分子生物学分册);1999年04期

7 ;[J];;年期

中国重要会议论文全文数据库 前2条

1 白明艳;李利;孙云峰;万平;杨志伟;;Belnapia moabensis的辐射抗性以及γ-射线辐照后的蛋白质组学分析[A];第四届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会论文集[C];2012年

2 李德冠;吴红英;王月英;路璐;孟爱民;张俊伶;王勇;王彦;常建辉;;IRM-2与亲代小鼠骨髓辐射抗性比较研究[A];全国生化与分子药理学药物靶点研讨会论文摘要集[C];2008年

中国硕士学位论文全文数据库 前3条

1 邵立虹;NRP1调控的MLL5和HOXA基因在NSCLC辐射抗性中的作用研究[D];吉林大学;2016年

2 陈剑;活性氧在抗辐射菌增殖和辐射抗性中的作用[D];苏州大学;2004年

3 薛景;SHG44细胞辐射抗性与Akt相关性的研究[D];苏州大学;2006年

，

本文编号：796117