多重 PCR 检测转基因水稻的转基因成分

  本文关键词：多重PCR检测转基因水稻的转基因成分，由笔耕文化传播整理发布。

※分析检测食品科学

2012, Vol. 33, No. 12

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多重PCR检测转基因水稻的转基因成分

魏 霜1，陈 贞1，芦春斌2，马 骏3，白卫滨1，吴希阳1,*

(1.暨南大学理工学院食品科学与工程系，广东 广州 510632；2.暨南大学生殖免疫研究所，广东 广州 510632；

3.广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，广东 广州 510623)

摘　　　要：以水稻内源基因SPS、外源抗虫基因Cry1Ab、外源抗虫基因Cry1Ab/Ac、外源抗虫基因Btc、报告基因GUS、NOS终止子和CaMV35S启动子为检测对象，设计7对引物，通过优化PCR扩增体系中不同引物浓度的配比及退火温度，建立水稻转基因成分的七重PCR检测体系。结果表明：建立的七重PCR体系能有效检测出水稻及其他作物(大豆、玉米、棉花籽、菜籽粕)中的转基因成分，检测过程简便、特异性好。关键词：转基因检测；水稻；七重PCR

Multiplex PCR Detection of Transgenic Components of Genetically Modified Rice

WEI Shuang1，CHEN Zhen1，LU Chun-bin2，MA Jun3，BAI Wei-bin1，WU Xi-yang1,*

(1.Department of Food Science and Engineering, College of Science and Engineering, Jinan University, Guangzhou 510632, China；2. Institute of Reproductive Immunology, Jinan University, Guangzhou 510632, China；3. Inspection and Quarantine Technology

Center, Guangdong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Guangzhou 510623, China)

Abstract ：In order to detect transgenic components in genetically modified rice, endogenous gene SPS, exogenous insect resistantgene Cry1Ab/Ac, exogenous insect resistant gene Cry1Ab, exogenous insect resistant gene Btc, reporter gene GUS, NOS terminatorand CaMV35S promoter were evaluated by multiplex polymerase chain reaction. Seven pairs of primers were designed, and primerconcentration and annealing temperature were optimized to establish a multiplex PCR system. The results showed that thedeveloped seven-plex PCR system could allow the detection of transgenic components in genetically modified rice and othercrops including soybean, corn, cottonseeds and rapeseed meal with high efficiency and good stability.Key words：transgenic detection；rice；seven-plex PCR

中图分类号：TS207.7 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2012)12-0159-04

水稻是占全世界50%人口的主粮，自第1批水稻转基因植株在1988年问世以来，许多国家在水稻转基因研究中取得一系列成果，许多转基因水稻育种材料已经进入田间试验，并不断向实用化方向发展。随着转基因产业的发展，转基因食品的安全性问题受到广泛关注，日本、欧盟等许多国家相继建立了转基因食品标识制度[1]。我国也于2002年3月20日起要求对5类转基因生物所涉及的17种转基因产品进行标识[2]。

目前对转基因植物产品的检测方法主要分为两类：第1类以导入外源基因的特定DNA序列为检测对象的检测技术，第2类以导入外源基因表达的蛋白质为对象的鉴定方法[3]。由于基于外源基因的检测方法具有简便、快速、准确等特点，成为转基因作物检测的常用技术，

收稿日期：2011-06-27

基金项目：农业部转基因重大专项(2008ZX08012-005)

包括常规PCR、巢式和半巢式PCR、RT-PCR(reversetranscription PCR)、PCR-ELISA技术等。Dietrich等[4]针对转基因水稻中的转基因成分，利用实时荧光定量PCR法进行了检测，，检测灵敏度为0.1%。陈茹等[5]利用PCR-ELISA技术建立了检测转基因水稻的体系，比常规电泳检测可提高敏感性达1000倍。这些方法虽然对结果有更加准确的把握，但是操作过程复杂，检测成本较高，对操作人员要求较高。

多重PCR是指在一次PCR反应中同时加入多对引物，同时扩增多个目的基因，只需要一次PCR反应，就能同时检测多个靶标基因，比传统PCR方法节约时间，减少费用，目前这项技术在动物病毒性传染病和人类疾病监测中应用较多。

作者简介：魏霜(1988—)，男，硕士研究生，研究方向为食品安全。E-mail：weishuang2008@*(16—)E-mail：

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