牛Mx1基因重组慢病毒载体的构建及沉默Mx1细胞的获得

发布时间：2017-09-08 19:06

  本文关键词：牛Mx1基因重组慢病毒载体的构建及沉默Mx1细胞的获得

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【摘要】：采用RT-PCR技术从牛肾细胞中扩增出Mx1基因,构建牛Mx1基因过表达重组载体;针对牛Mx1mRNA序列设计shRNA引物对,构建针对牛Mx1的RNAi载体。将牛Mx1的过表达载体和RNAi载体共转染293T细胞,利用Western blot方法检测牛Mx1蛋白的表达情况,筛选有效沉默牛Mx1的shRNA;将有效沉默Mx1的RNAi载体转染牛胎儿气管原代上皮细胞,经流式细胞分选,Western blot检测,获得沉默牛Mx1的稳定细胞系。结果表明,成功构建了牛Mx1过表达重组载体pcDNA3.1-Mx1和RNAi载体RNAi-Mx1A、RNAi-Mx1B、RNAi-Mx1C,筛选到RNAi-Mx1A沉默牛Mx1效果最好;经流式细胞分选和Western blot检测,获得有效沉默牛Mx1的牛胎儿气管原代上皮细胞,为进一步探讨牛Mx1抗病毒作用及机制的研究奠定试验基础。
【作者单位】： 吉林农业大学动物科技学院;山东省农业科学院奶牛研究中心;军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室;
【关键词】： 牛Mx基因 胎儿原代气管上皮细胞 RNA干扰
【基金】：现代农业(奶牛)产业技术体系科学家岗位基金资助项目(Cars-37) 国家自然科学基金资助项目(31272586;31302095) 山东省农业重大应用技术创新课题资助项目 兽医生物技术国家重点实验室开放课题基金资助项目(SKLVBF201510) 山东省自然科学基金培养基金资助项目(ZR2014CP029) 山东省科技发展计划资助项目(2014GGC02058) 山东省农业科学院科技创新重点项目子课题资助项目(2014CXZ08-3);山东省农业科学院重大成果培育项目资助项目(2015CGPY02)
【分类号】：S823
【正文快照】： RNAi-Mx1C.RNAi-Mx1Astrongly suppressed the transient expression of a Flag-tagged Mx1fu-sion protein in 293Tcells.The bovine fetal primary trachea epithelia cells silencing bovine Mx1were established by FACS and Western blot analysis,and it provides a goo，

本文编号：815775